Brg1在乳腺癌中的作用研究.pdf

1、目的：研究Brg1（Brahma-related gene1）在乳腺癌中的作用。
　　方法：收集正常乳腺組織及不同階段乳腺病變的標(biāo)本進(jìn)行Brg1指標(biāo)的免疫組化染色；統(tǒng)計(jì)分析Brg1與各個(gè)臨床病理參數(shù)和臨床亞型之間的相關(guān)性；構(gòu)建Brg1野生型（WT）質(zhì)粒及激酶失活型突變體（突變位點(diǎn)為K785R），利用脂質(zhì)體將空載體質(zhì)粒、WT質(zhì)粒和突變體質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)入人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞，觀察高表達(dá)Brg1對(duì)該細(xì)胞增殖和凋亡的影響；利用攜帶

2、有靶向下調(diào) Brg1小干擾 RNA序列的慢病毒感染 MCF-7細(xì)胞構(gòu)建穩(wěn)定下調(diào) Brg1表達(dá)的細(xì)胞模型；用多西他賽（DXT）處理不同乳腺癌細(xì)胞，Western Bolt技術(shù)檢測(cè)藥物作用下細(xì)胞中Brg1蛋白表達(dá)變化；用DXT分別處理MCF-7 siBrg1細(xì)胞和陰性對(duì)照MCF-7 siNC細(xì)胞，用流式細(xì)胞術(shù)及CCK8法分別檢測(cè)細(xì)胞的凋亡和存活，觀察下調(diào)Brg1后乳腺癌細(xì)胞MCF-7對(duì)DXT敏感性的影響。
　　結(jié)果：Brg1在正常乳腺

3、導(dǎo)管上皮細(xì)胞核內(nèi)呈現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá)，隨著疾病的進(jìn)展，Brg1的表達(dá)呈現(xiàn)明顯的下降趨勢(shì)；在238例浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織切片染色分析中發(fā)現(xiàn)Brg1的表達(dá)與人表皮生長(zhǎng)因子受體-2（Her2）和激素受體的表達(dá)呈正相關(guān)，Brg1缺失主要發(fā)生在三陰性乳腺癌（TNBC）中；在MDA-MB-231細(xì)胞中，Brg1 WT質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后增殖細(xì)胞數(shù)量百分比為31.25±0.65％，低于空載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組的45.56±0.30%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；Brg1 WT質(zhì)粒及Brg

4、1 K785R質(zhì)粒轉(zhuǎn)染MDA-MB-231細(xì)胞后凋亡細(xì)胞比例分別為15.24±0.50%和19.97±0.24%，與空載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組凋亡細(xì)胞比例（6.82±0.81%）相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；在DXT的作用下，多種乳腺癌細(xì)胞內(nèi)Brg1表達(dá)上調(diào)；在不同DXT藥物濃度梯度的作用下（0nM、1nM、10nM、100nM），MCF-7 siBrg1細(xì)胞的凋亡率分別為19.96±1.02%、21.65±0.65%、36.07±0.58%、48.8

5、4±0.79%，相應(yīng)濃度作用下的MCF-7 siNC細(xì)胞凋亡率分別為11.98±0.42%、27.25±0.56%、52.27±0.31%、63.55±0.98%，在同一濃度的DXT作用下，MCF-7 siBrg1細(xì)胞的凋亡率始終低于MCF-7 siNC細(xì)胞，在DXT濃度為10nM和100nM時(shí)差異顯著，該差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；CCK8檢測(cè)發(fā)現(xiàn)在不同 DXT藥物作用濃度梯度下，MCF-7 siBrg1細(xì)胞的細(xì)胞活力高于MCF-7 siNC細(xì)