Periostin在胃癌侵襲和轉移中的機制及臨床意義的研究.pdf

1、目的：
　　 1.探索periostin基因沉默后對胃癌細胞增殖、凋亡、侵襲的影響；
　　 2.研究胃癌患者的胃癌組織和血清中periostin蛋白的表達及其與臨床病理因素的相關性。
　　 方法：
　　 1)通過細菌轉化、酶切、凝膠電泳、基因測序鑒定和基因重組技術等方法構建針對periostin的siRNA質粒pRNAT-U6.1-periostin和陰性對照質粒pRNAT-U6.1-CON。利用脂質體介

2、導轉染技術轉染人胃癌SGC-7901細胞，經G418篩選得到穩(wěn)定抑制periostin表達的胃癌細胞模型(siRNA-periostin細胞)；
　　 2)采用半定量逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測siRNA-periostin細胞中periostin mRNA的表達。通過MTT比色法檢測periostin基因沉默對胃癌細胞體外增殖能力的影響。PI染色固定的方法檢測periostin基因沉默對胃癌細胞周期分布的改變。Ann

3、exin V和PI雙染并經流式細胞儀檢測轉染細胞對化學藥物氟尿嘧啶(5-FU)的敏感性。采用Boyden小室侵襲實驗檢驗periostin基因沉默對胃癌細胞侵襲性的影響。
　　 3)利用免疫組織化學技術檢測74例胃癌組織及35例非腫瘤胃黏膜中periostin蛋白和COX-2的表達，分析其與臨床病理學參數(shù)的關系。應用酶聯(lián)免疫吸附實驗檢測胃癌患者手術前后及健康志愿者血清periostin蛋白的COX-2的表達水平，并分析與臨床病理

4、學參數(shù)的關系。
　　 結果：
　　 1)用免疫印跡檢測了尼古丁處理后胃癌SGC-7901細胞，periostin蛋白表達顯著升高；COX-2特異性抑制劑NS398預處理后的胃癌SGC-7901細胞，尼古丁對periostin蛋白的上調作用幾乎被完全阻斷，同時單純抑制COX-2也能使periostin蛋白的表達下調。
　　 2)應用小干擾RNA技術(siRNA)，在胃癌細胞SGC7901中特異性沉默periosti

5、n基因的mRNA表達后，尼古丁處理的胃癌細胞的增殖速度顯著降低；對化學藥物氟尿嘧啶(5-FU)的凋亡敏感性增強，特別是在48h和72h時的增敏作用更顯著；同時，無論是對于未處理細胞，還是尼古丁處理細胞，EMT標志基因Snail蛋白的表達均顯著降低。
　　 3)免疫組織化學技術檢測，periostin和COX-2，在胃癌組織中的表達強度均顯著高于非胃癌對照；酶聯(lián)免疫吸附實驗，發(fā)現(xiàn)無論periostin還是COX-2，在胃癌患者血清

6、中的濃度均顯著高于健康人群的血清濃度。
　　 4)通過臨床病理分析，periostin和COX-2的表達與有無淋巴結轉移、腫瘤浸潤深度有關，與腫瘤分化程度與性別無關。同時發(fā)現(xiàn)periostin蛋白表達在血清和胃癌組織之間缺乏顯著相關性，但血清和胃癌組織中periostin和COX-2蛋白表達具有顯著相關性，手術后胃癌患者血清periostin和COX-2均顯著降低證實了相關聯(lián)系。
　　 結論：
　　 1)peri

7、ostin是尼古丁在胃癌細胞中的一個調控靶基因，其受尼古丁上調表達是COX-2依賴性的。
　　 2)siRNA沉默periostin基因表達能抑制胃癌細胞的生長增殖、侵襲和轉移，促進胃癌細胞對化學藥物凋亡的敏感性。
　　 3)胃癌患者periostin蛋白血清濃度和胃癌組織表達顯著高于健康人群。在胃癌患者中，具有淋巴結轉移和腫瘤浸潤較深的患者，其血清和胃粘膜periostin蛋白更高。胃癌患者periostin蛋白在行胃