P-糖蛋白在不同膀胱癌細(xì)胞株間的選擇性轉(zhuǎn)移.pdf

1、目的：
　　探討功能性P-糖蛋白在膀胱癌不同細(xì)胞株間是否存在選擇性轉(zhuǎn)移及其機(jī)制。
　　方法：
　　用Transwell將膀胱癌耐藥株細(xì)胞BIU-87/ADM分別與敏感膀胱癌細(xì)胞株T24和EJ進(jìn)行共培養(yǎng)，共聚焦顯微鏡觀察共培養(yǎng)Transwell下室的T24和EJ細(xì)胞（即獲得性耐藥細(xì)胞AqMDR）P-糖蛋白的轉(zhuǎn)移，利用Western Blot檢測(cè)BIU-87/ADM、T24/aqMDR、T24、EJ/aqMDR及EJ細(xì)胞P

2、-gp的表達(dá)量，利用RT-PCR分析這些細(xì)胞MDR1 mRNA的表達(dá)水平。采用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)BIU-87/ADM、T24/aqMDR、T24、EJ/aqMDR及EJ細(xì)胞內(nèi)羅丹明-123熒光強(qiáng)度。利用RT-PCR分別對(duì)BIU-87/ADM、BIU-87、EJ、T24細(xì)胞中幾種介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞間惡性特質(zhì)轉(zhuǎn)移的細(xì)胞膜蛋白或受體（CD44分子、Ezrin蛋白、整合素?1）的mRNA表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)。
　　結(jié)果：
　　共聚焦結(jié)果顯示這些細(xì)胞

3、核均呈藍(lán)色熒光，胞漿和胞膜呈不同程度的綠色熒光，BIU-87/ADM呈強(qiáng)綠色熒光，T24/aqMDR呈中等強(qiáng)度綠色熒光，而T24、EJ/aqMDR及EJ細(xì)胞均呈現(xiàn)弱綠色熒光。Western Blot檢測(cè)結(jié)果顯示，BIU-87/ADM細(xì)胞中P-gp的表達(dá)水平最高，T24/aqMDR細(xì)胞中P-gp的表達(dá)弱于BIU-87/ADM細(xì)胞（p<0.05），卻明顯強(qiáng)于T24細(xì)胞（p<0.05），而EJ/aqMDR和EJ細(xì)胞中P-gp表達(dá)水平均較低。R

4、T-PCR結(jié)果顯示，只有BIU-87/ADM細(xì)胞中MDR1 mRNA表水平較高，而其余四種細(xì)胞表達(dá)水平很低且彼此間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）。羅丹明123試驗(yàn)顯示：BIU-87/ADM、T24/aqMDR、T24、EJ/aqMDR及EJ細(xì)胞內(nèi)熒光強(qiáng)度依次增高，其中T24、EJ/aqMDR及EJ細(xì)胞中熒光強(qiáng)度均較強(qiáng)且彼此間差異亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）。RT－PCR檢測(cè)CD44分子、Ezrin蛋白、整合素?1在七種細(xì)胞中表達(dá)水平

5、均較高，但彼此間差異也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）。
　　結(jié)論：
　　P-gp能夠從耐藥的膀胱癌細(xì)胞株BIU-87/ADM轉(zhuǎn)移到敏感的膀胱癌細(xì)胞株T24中，且這種獲得性P-gp具有藥物外排功能。而P-gp不能或者很少量從耐藥的膀胱癌細(xì)胞株BIU-87/ADM轉(zhuǎn)移到敏感的膀胱癌細(xì)胞EJ中。在共培養(yǎng)前后P-gp轉(zhuǎn)移的過(guò)程中不伴有多藥耐藥基因MDR1的轉(zhuǎn)移。這一現(xiàn)象說(shuō)明P-gp在膀胱癌不同細(xì)胞株間轉(zhuǎn)移具有選擇性，在以微粒（MPs）