姜黃素對膀胱癌細(xì)胞株T24miRNA表達(dá)譜的影響及其機(jī)制的探討.pdf

1、背景與目的：
　　姜黃素(curcumin)是印度香料姜黃中主要的姜黃類化合物，主要通過抑制細(xì)胞生長、促進(jìn)細(xì)胞凋亡而發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)，其具體機(jī)制包括了對多個信號通路的調(diào)節(jié)。最近有研究表明姜黃素能通過微小RNA(microRNA，miRNA)發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)。miRNA是一類長約22nt的小分子RNA，與靶mRNA堿基不完全配對而抑制mRNA的翻譯或完全配對直接降解mRNA，從而發(fā)揮轉(zhuǎn)錄后基因表達(dá)調(diào)控作用。在肺癌和胰腺癌細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)姜黃素

2、能影響miRNA表達(dá)譜，通過癌基因微小RNA(oncogenic microRNA，oncomiR)的改變進(jìn)而發(fā)揮其抗腫瘤效應(yīng)[1，2];同時不同細(xì)胞中miRNA譜的改變存在差異。我們擬研究姜黃素對膀胱移行細(xì)胞癌細(xì)胞系T24 miRNA表達(dá)譜的影響，探討姜黃素抗膀胱癌細(xì)胞的miRNA的機(jī)制。
　　方法：
　　采用Affemitrix miRNA芯片檢測姜黃素對T24細(xì)胞miRNA表達(dá)譜的影響，以2倍改變值為閾值，篩選出差異表

3、達(dá)miRNA分子;采用miRPATH在線軟件分析差異表達(dá)miRNA分子參與的信號通路，并與文獻(xiàn)中姜黃素對相關(guān)信號通路的影響進(jìn)行比較。Western blot檢測相關(guān)信號通路中差異miRNA分子靶基因蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　12.5μM姜黃素處理后，T24細(xì)胞表達(dá)譜發(fā)生了改變（以2倍為閾值）;與溶劑對照組比較，姜黃素處理24h組有4個miRNA分子表達(dá)差異明顯，hsa-m iR-185和hsa-miR-494表達(dá)下調(diào)，h

4、sa-miR-671-5p和hsa-miR-1307表達(dá)上調(diào);姜黃素處理48h組有7個miRNA分子表達(dá)差異明顯(hsa-miR-181b、hsa-miR-138、hsa-miR-149、hsa-miR-339-5p、hsa-miR-193b、hsa-miR-455-3p和hsa-miR-744），且其表達(dá)均上調(diào)。
　　MiRPATH在線軟件（microT4.0版本）靶基因預(yù)測軟件總共檢索到的靶基因2946個，參與KEGG信號通路

5、的靶基因數(shù)目總共有592個。這些靶基因參與的信號通路包括了KEGG歸類的六種信號通路，其中信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞移動、生長與死亡、細(xì)胞通訊、癌相關(guān)信號通路與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。通過文獻(xiàn)復(fù)習(xí)，我們從相關(guān)信號通路中選擇了一些與細(xì)胞生長密切相關(guān)的靶基因進(jìn)行驗證，結(jié)果表明，細(xì)胞周期素cyclinD1表達(dá)下降，促凋亡因子Bax和Bid表達(dá)上調(diào)，核轉(zhuǎn)錄因子p65表達(dá)下調(diào)，TGF-β效應(yīng)因子Smad3、Smad4，蛋白翻譯啟動因子成員EIF4E及血管生成