樂(lè)復(fù)能在小鼠L929細(xì)胞中的抗病毒活性測(cè)定.pdf

1、目的:檢驗(yàn)樂(lè)復(fù)能是否具有種間交叉生物活性;測(cè)定樂(lè)復(fù)能在VSV感染的小鼠成纖維細(xì)胞系L929中的抗病毒活性;探討其進(jìn)一步進(jìn)行臨床前的人類疾病小鼠模型研究的可行性。
　　方法:培養(yǎng)小鼠成纖維細(xì)胞系L929，將其制備成細(xì)胞懸液，接種于96孔板中置溫箱中過(guò)夜培養(yǎng)。以不同的濃度起始，連續(xù)對(duì)倍稀釋樂(lè)復(fù)能和重組小鼠干擾素α1(MuIFN-α1)，并依次加入96孔板的培養(yǎng)細(xì)胞中，設(shè)置正常細(xì)胞對(duì)照孔，繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)。棄培養(yǎng)液后，在樂(lè)復(fù)能組、MuI

2、FN-α1組添加含有VSV病毒的完全培養(yǎng)基(MOI:0.1)，并設(shè)置正常細(xì)胞對(duì)照組和病毒對(duì)照組，連續(xù)培養(yǎng)36小時(shí)。吸出細(xì)胞培養(yǎng)液，0.85％ NaCl漂洗后拍干，添加細(xì)胞染色液室溫下染色2小時(shí)。自來(lái)水漂凈染色液，室溫下完全干燥后，每孔加入2-甲氧基乙醇(2-methoxyethanol)，靜置45分鐘脫色，酶標(biāo)儀檢測(cè)各細(xì)胞孔的吸光值。實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次，結(jié)果取平均值，并計(jì)算保護(hù)率。以藥物濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸，保護(hù)率為縱軸分別繪制樂(lè)復(fù)能和MuIF

3、N-α1在L929-VSV系統(tǒng)中的回歸分析圖，并通過(guò)線性回歸方法計(jì)算兩種藥物的50％最大效應(yīng)濃度(EC50)。
　　結(jié)果:①樂(lè)復(fù)能組和MuIFN-α1組細(xì)胞的OD550值均明顯升高。計(jì)算兩組藥物對(duì)小鼠L929細(xì)胞的保護(hù)率，均隨著藥物濃度的增高而增大，兩者呈正相關(guān)（樂(lè)復(fù)能:r=0.972，p＜0.001; MuIFN-α1:r=0.950，p＜0.001)。通過(guò)藥物濃度和細(xì)胞保護(hù)率相關(guān)曲線發(fā)現(xiàn)，相同濃度下，MuIFN-α1在小鼠L9

4、29細(xì)胞中的對(duì)細(xì)胞的保護(hù)率較樂(lè)復(fù)能高，即抗病毒活性更明顯。②通過(guò)線性回歸的方法計(jì)算出樂(lè)復(fù)能和MuIFN-α1的EC50值分別為:170.752pg和38.810pg。由此推算樂(lè)復(fù)能在L929-VSV系統(tǒng)中抗病毒活性為6.32×106IU/mg。證實(shí)樂(lè)復(fù)能在VSV病毒感染的小鼠L929細(xì)胞中具有良好的抗病毒活性，提示其具有較強(qiáng)的種間交叉作用。
　　結(jié)論:①樂(lè)復(fù)能和MuIFN-α1均對(duì)感染VSV病毒的小鼠L929細(xì)胞具有保護(hù)作用，且保