小鼠Tim-2基因在L929細胞表達后促進鐵蛋白的內吞.pdf

1、本研究分為二部分：第一部分：小鼠Tim-2基因在L929細胞表達后促進鐵蛋白的內吞。
　　 目的：獲取BALB/c小鼠T細胞免疫球蛋白域粘蛋白域蛋白-2（T cell immunoglobulin and mucin domain containing molecules-2，Tim-2）基因，構建真核表達載體在L929細胞中表達并研究其功能。
　　 方法：RT－PCR獲取BALB/c小鼠Tim-2基因，T-A克隆后經(jīng)測

2、序鑒定后酶切，插入pEGFP-N1真核表達載體，脂質體轉染L929細胞，熒光顯微鏡觀察外源基因的表達,然后加入鐵蛋白與轉染細胞作用。
　　 結果：外源基因在L929細胞中得到高效表達，熒光顯微鏡的結果顯示，外源基因定位于細胞膜上，并能促進細胞對鐵蛋白的內吞。
　　 結論：Tim-2基因在真核細胞中表達后定位于細胞膜上，并促進細胞對鐵蛋白的內吞。
　　 第二部分：昆明小鼠Tim-2基因的單個核苷酸變異的研究。

3、>　　 目的：研究T細胞免疫球蛋白域粘蛋白域蛋白（T cell immunoglobulin-and mucin-domain-containing molecules，Tim）基因家族的成員之一――Tim-2基因在昆明鼠體內的單核苷酸多態(tài)性，以提示昆明鼠在腫瘤學和免疫學的相關試驗中有可能出現(xiàn)的與國際通用的其它品系小鼠（如BALB/c小鼠）不同的生物學特性。
　　 方法：取不同來源的五只昆明小鼠的肝組織，提取總RNA后逆轉錄得

4、到cDNA，使用特異性引物通過PCR擴增得到Tim-2基因，克隆后測序，然后比較測序圖譜。
　　 結果：測序結果與Genebank中的Tim-2序列相比，451（TCC→GCC:絲氨酸→丙氨酸），502，504（CCA→TCT:脯氨酸→絲氨酸），586，587（GAT→TCT:天冬氨酸→絲氨酸）。其他變異位點無氨基酸改變。
　　 結論：提示昆明小鼠與國際通用的其它品系小鼠（如BALB/c小鼠）Tim-2基因所編碼的蛋白質