在異種心臟移植免疫耐受的誘導(dǎo)中MSCs修飾胸腺的可行性實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：豚鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)體外擴(kuò)增后作為種子細(xì)胞行大鼠胸腺注射，以了解作為種子細(xì)胞的MSCs在受體胸腺內(nèi)的演化過(guò)程，并對(duì)異種心臟移植免疫耐受的誘導(dǎo)中MSCs修飾胸腺的可行性進(jìn)行論證。同時(shí)，通過(guò)豚鼠到大鼠腹腔心臟移植模型，觀察受體大鼠產(chǎn)生異種移植免疫耐受的現(xiàn)象。 方法：取豚鼠MSCs進(jìn)行分離純化體外擴(kuò)增至第三代，并行超順磁多聚賴氨酸氧化鐵納米(Fe203-PLL)顆粒和4，6-二咪基一4．聯(lián)苯基吲哚(DAPI)標(biāo)記，標(biāo)

2、記后的豚鼠MSCs行胸腺注射，7天后進(jìn)行切片普魯士藍(lán)染色和熒光顯微鏡觀察豚鼠MSCs形態(tài)改變。 豚鼠到大鼠腹腔心臟移植誘導(dǎo)免疫耐受的實(shí)驗(yàn)分三組。供體(三色豚鼠)和受體(SD大鼠)隨機(jī)分為：A組(對(duì)照組)：僅行豚鼠到大鼠腹腔心臟移植，在心臟移植前和后對(duì)受體不作任何處理。B組(胸腺修飾IT組)：1—5×l05MSCs胸腺注射后第7天行豚鼠到大鼠腹腔心臟移植，余處理同A組。C組(IT加CVF組)：MSCs胸腺注射后第6天在受體腹腔注射

3、中華眼睛蛇毒因子(CVF)40u／kg(即0．4mg／kg)。24小時(shí)后心臟移植手術(shù)時(shí)下腔靜脈再次注射才CVF60u／kg。D組(CVF組)：術(shù)前24小時(shí)腹腔注射中華眼睛蛇毒因子(CVF)40u／kg(即0．4mg／kg)，手術(shù)前下腔靜脈注射CVF60u／kg。觀測(cè)指標(biāo)：移植心臟的存活時(shí)間、病理改變、供受體淋巴細(xì)胞毒性試驗(yàn)。 結(jié)果：豚鼠間充質(zhì)干細(xì)胞能適應(yīng)大鼠胸腺微環(huán)境并能生存，參與血管壁的形成，可以轉(zhuǎn)化為胸腺前T細(xì)胞和被膜下間質(zhì)

4、細(xì)胞等多種組織細(xì)胞，同時(shí)大鼠胸腺有部分組織溶解壞死萎縮。 (1)病理：供心停跳時(shí)A、B組心臟病理表現(xiàn)均呈典型超急性排斥反應(yīng)(HAR)表現(xiàn)，C、D組呈遲發(fā)性排斥反應(yīng)(DXR)表現(xiàn)。(2)供心平均存活時(shí)間(MST)：A組18．80±10．83分鐘，B組8．4±3．97分鐘，C組344±55．50分鐘，D組：297±82．43分鐘。A與B組及C與D組間比較P＞0．05。C、D組平均存活時(shí)間延長(zhǎng)較A、B明顯延長(zhǎng)P<0．05。(3)供受體

5、異種混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(XMLR)，測(cè)得光密度值(OD值)分別為：A組：0．764-0．03，B組：0．744-0．02，C組：0．634-0．04，D組：0．65+0．02；空白OD值為：0．30±0．04。其中B組較A組減弱但P＞0．05，C、D組比較P＞0．05，A、B組與C、D組間比較P＜0．05。 結(jié)論：受體大鼠胸腺微環(huán)境能適合豚鼠間充質(zhì)干細(xì)胞生存，并轉(zhuǎn)化為多種組織細(xì)胞，同時(shí)大鼠胸腺有部分組織溶解壞死萎縮。 豚鼠