非清髓性骨髓移植誘導(dǎo)異基因小鼠免疫耐受的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：通過非清髓性預(yù)處理方案聯(lián)合髓腔內(nèi)骨髓移植(IBM-BMT)建立異基因小鼠免疫耐受模型，并初步探討該方法誘導(dǎo)免疫耐受的機(jī)理。 方法：選擇雌性C57BL/6(H-2b，B6)小鼠為受鼠，雄性BALB/C(H-2d)小鼠為供鼠。第0天接受60Coγ射線5.5Gy亞致死劑量全身照射(TBI)，劑量率0.5Gy/min，4小時(shí)內(nèi)輸注供鼠來源的骨髓細(xì)胞(BMCs)3×107/只，2天后腹腔注射環(huán)磷酰胺(CTX)200mg/kg。B6小

2、鼠隨機(jī)分為3組：空白組(A組)：?jiǎn)渭兘邮芷つw移植；對(duì)照組(B組)：預(yù)處理當(dāng)天不進(jìn)行骨髓移植，2天后注射CTX；實(shí)驗(yàn)組(C組)：預(yù)處理當(dāng)天給予骨髓移植，2天后注射CTX。通過皮膚移植、混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)檢測(cè)耐受狀態(tài)，通過體外過繼轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)、IL-2逆轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)、嵌合體分析等進(jìn)一步探討免疫耐受的機(jī)制，并觀察供者淋巴細(xì)胞輸注(DLI)對(duì)嵌合狀態(tài)的影響。 結(jié)果：無論是否進(jìn)行IBM-BMT，B、C兩組經(jīng)TBI+CTX處理的小鼠無1例死亡

3、；BMT后第30、60天C組受鼠脾細(xì)胞對(duì)BALB/C小鼠脾細(xì)胞的MLR均明顯降低(與A組相比，P＜0.01)，而對(duì)無關(guān)供鼠KM小鼠的反應(yīng)各組間比較差異無顯著性(P＞0.05)；C組受鼠對(duì)BALB/C小鼠脾細(xì)胞的低反應(yīng)性可以被外源性IL-2部分逆轉(zhuǎn)；該耐受狀態(tài)可以通過脾細(xì)胞發(fā)生體外過繼轉(zhuǎn)移；第45、90天C組受鼠骨髓中可以檢測(cè)到混合嵌合體存在；第90天受鼠(黑色)表型開始呈現(xiàn)明顯供鼠(白色)顏色特征；接受IBM-BMT的受鼠在觀察期間(＞

4、6月)無一例發(fā)生急慢性移植物抗宿主病(GVHD)，接受DLI的C組受鼠其皮膚表型改變較未接受DLI者能維持更長(zhǎng)時(shí)間(超過100天)。C組小鼠BALB/C來源的移植皮膚平均存活時(shí)間(MST)＞300天，與B組比較差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)；對(duì)無關(guān)供鼠皮膚移植物的存活時(shí)間各組間差異無顯著性(P＞0.05)。 結(jié)論：非清髓性預(yù)處理聯(lián)合IBM-BMT可以有效的誘導(dǎo)異基因小鼠長(zhǎng)期穩(wěn)定的供者特異性免疫耐受狀態(tài)；且不伴有急慢性GV