大鼠胚胎后腎和胸腺原基聯(lián)合異種移植與誘導(dǎo)免疫耐受的實(shí)驗研究.pdf

1、胚胎后腎移植在同種SD成年大鼠體內(nèi)能夠再血管化，形成器官并具有一定的泌尿功能；但是排斥反應(yīng)仍然是影響胚胎后腎同種和異種移植后器官形成的最主要制約。盡管使用免疫抑制劑對排斥反應(yīng)有一定的抑制作用，但是，長期全身非特異性免疫抑制，增加了并發(fā)癥的發(fā)生機(jī)會。 誘導(dǎo)免疫耐受是目前實(shí)驗和臨床研究的重點(diǎn)。中央型耐受由于它提供了全身性的、持續(xù)終生的胸腺陰性選擇，因而被認(rèn)為是T細(xì)胞耐受中最強(qiáng)大的類型，是最有臨床應(yīng)用希望的誘導(dǎo)耐受的方法。 胸

2、腺移植是另一很有希望誘導(dǎo)中央型移植免疫耐受的方案。本研究擬在有關(guān)胚胎后腎原基移植研究的基礎(chǔ)上，利用無胸腺裸小鼠進(jìn)行大鼠胚胎后腎和胸腺原基聯(lián)合移植，初步探討聯(lián)合胸腺移植后免疫功能重建與誘導(dǎo)受者對異種供者器官的特異性免疫耐受的關(guān)系。 材料與方法: 1、雌性大鼠受孕清潔級近交系Lewis大鼠同系雌雄之間同籠配種一整夜，次日早晨雌性大鼠出現(xiàn)陰道栓提示受孕成功，該日視作受孕第0天(Embryonic dayO，EO)。取受孕第16

3、d(E16)的胚胎后腎、胸腺原基分組進(jìn)行實(shí)驗。 2、大鼠胚胎及后腎、胸腺的提取受孕第16d(E16)的Lewis大鼠麻醉后剖腹從子宮中摘取胚胎，胚胎立即置于0-4℃冷生理鹽水中，手術(shù)顯微鏡輔助下，從胚胎中提取胚胎后腎、胸腺原基。解剖、清理胚胎后腎、胸腺原基，置于0～4℃冷生理鹽水中保存。15-25分鐘內(nèi)植入成年近交系Balb/c裸小鼠腹腔內(nèi)，其中胚胎后腎植入大網(wǎng)膜內(nèi)，而將胸腺原基植入右腎包膜下。 3、大鼠胚胎后腎植入成年

4、受體網(wǎng)膜近交系Balb/c裸小鼠40只作為移植受體，雌雄不限，隨機(jī)數(shù)字法分成Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組。 按照設(shè)計隨機(jī)分組，每組近交系Balb/c裸小鼠10只，其中第1組各只裸小鼠腹腔大網(wǎng)膜內(nèi)植入成對胚胎后腎，右腎包膜下植入成對胸腺原基；第Ⅱ組各只裸小鼠僅在大網(wǎng)膜內(nèi)植入成對胚胎后腎，不作胸腺原基移植：第Ⅲ組各只裸小鼠僅在右腎包膜下植入成對胚胎胸腺原基，不作后腎原基移植；第Ⅳ組各只裸小鼠僅作開腹手術(shù)，不作移植，用作對照。小鼠移植后第21天及

5、第35天開腹觀察存活裸鼠的移植器官形成情況，取標(biāo)本進(jìn)行組織病理學(xué)、移植后腎功能等檢測，并作切除雙腎后的生存時間比較。移植后6周進(jìn)行皮膚移植實(shí)驗，移植后12周行脾細(xì)胞單向混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)檢查及外周血T淋巴細(xì)胞流式細(xì)胞學(xué)檢測。 結(jié)果: 1、病理學(xué)表現(xiàn)移植第3周和第5周，各受體鼠E16移植胸腺及胚胎后腎皆發(fā)育完好，病理切片及電鏡檢查可見發(fā)育正常的移植胸腺及后腎組織結(jié)構(gòu)。 2、移植后腎積液的生化檢測及功能檢測移

6、植后第5周，Ⅰ組、Ⅱ組部分受體小鼠開腹，切除雙側(cè)腎臟，抽吸E16后腎的輸尿管或腎盂積液，測其尿素氮、肌酐值：Ⅳ組也取部分小鼠切除雙側(cè)腎臟；觀察比較各組雙腎切除后的生存時間。結(jié)果顯示，Ⅰ組、Ⅱ組各受體生存時間均明顯長于Ⅳ組。另外比較Ⅰ組、Ⅱ組的雙腎切除后的生存時間，發(fā)現(xiàn)前者明顯長于后者。 3、皮膚移植實(shí)驗移植后6周，分別取供體Lewis大鼠、同種對照C57BL/6(H-2b,)小鼠、第三品系BN大鼠皮膚片及受體BALB/c裸小鼠自

7、身皮片分別移植至Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ組受體裸小鼠，進(jìn)行皮膚移植實(shí)驗。結(jié)果，移植至第1組和第Ⅲ組的C57BL/6(H-2b)小鼠、第三品系BN大鼠皮膚片平均存活時間明顯小于移植至Ⅱ組和Ⅳ組的皮片；移植至Ⅰ、Ⅲ組的胸腺供體來源的供體Lewis大鼠皮膚平均存活時間明顯大于C57BL/6(H-2b)小鼠、第三品系BN大鼠皮膚片平均存活時間。 4、不同組受體裸小鼠脾細(xì)胞單向混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)結(jié)果胚胎胸腺和/或后腎原基移植后12周，不同組

8、受體BALB/c裸小鼠分別取供體Lewis大鼠、同種對照C57BL/6(H-2b)小鼠及第三品系BN大鼠脾細(xì)胞進(jìn)行單向混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)。Ⅰ、Ⅲ組的脾細(xì)胞對供體Lewis大鼠脾細(xì)胞的刺激呈低反應(yīng)；Ⅰ、Ⅲ組的脾細(xì)胞對同種異體C57BL/6小鼠及第三品系BN大鼠的脾細(xì)胞的刺激有良好的反應(yīng)性。 5、流式細(xì)胞儀測定受體T淋巴細(xì)胞的重建情況實(shí)驗結(jié)果表明異種胸腺植入裸小鼠12周后，Ⅰ、Ⅲ組的CD3+CD4+T細(xì)胞的百分率有明顯升高