槲皮素對OX-LDL誘導人臍靜脈血管平滑肌細胞MMP-2和MMP-9表達的影響.pdf

1、目的:研究OX-LDL對人臍靜脈血管平滑肌細胞MMP-2和MMP-9表達的影響，探討槲皮素干預OX-LDL誘導的血管平滑肌細胞遷移、浸潤的機制。
　　方法:本實驗研究分三部分:實驗一:不同濃度槲皮素第一細胞活性的影響。1、將不同濃度槲皮素(5μmol/l、10μmol/l、20μmol/l、50μmol/l、100μmol/l)加入人臍靜脈血管平滑肌細胞培養(yǎng)皿中干預24h，MTT法檢測細胞存活率。實驗二:OX-LDL誘導MMP-2

2、和MMP-9分泌的時間、劑量依賴性。2.1、不同濃度的OX-LDL(10μg/ml、20μg/ml50μg/ml)體外誘導培養(yǎng)人臍靜脈血管平滑肌細胞24h，采用ELISA檢測細胞上清液中MMP-2和MMP-9的濃度。2.2、將同一濃度的OX-LDL(20μg/ml)作用于人臍靜脈血管平滑肌細胞不同時間(6h、12h、24h)，ELISA檢測細胞上清液中MMP-2和MMP-9的濃度。實驗三:觀察槲皮素對OX-LDL誘導人臍靜脈平滑肌細胞分

3、泌MMP-2和MMP-9的抑制作用。在上述實驗基礎上，分為正常對照組，OX-LDL(20μg/ml)組，OX-LDL(20μg/ml)+槲皮素(10μmol/l)組，OX-LDL(20μg/ml)+槲皮素(50μmol/l)組，OX-LDL(20μg/ml)+槲皮素(100μmol/l)組。通過ELISA和PCR檢測細胞上清液中MMP-2和MMP-9的濃度和其mRNA表達情況并用明膠酶譜法分析MMP-2和MMP-9的活性。
　　結

4、果:1.MTT結果顯示隨著槲皮素濃度(5μmol/l、10μmol/l、20μmol/l、50μmol/l、100μmol/l)增加，各組細胞存活率無明顯差異，說明0-100μmol/l濃度的槲皮素對人臍靜脈平滑肌細胞的活性無明顯影響。2.細胞培養(yǎng)上清液檢測結果顯示，隨著OX-LDL(10μg/ml、20μg/ml、50μg/ml)濃度增加，MMP-9的濃度逐漸增加，MMP-2的濃度在20μg/mlOX-LDL時達最高濃度。3、同時隨著

5、OX-LDL作用時間(6h、12h、24h)的延長，細胞上清中MMP-2和MMP-9的濃度逐漸增加。4、細胞培養(yǎng)24小時，與正常對照組相比，其余各組細胞上清中MMP-2和MMP-9的濃度明顯增加（P＜0.05）。與OX-LDL(20μg/ml)組比較，OX-LDL(20μg/ml)+槲皮素(50μmol/l)組和OX-LDL(20μg/ml)+槲皮素(100μmol/l)組，細胞上清中MMP-2和MMP-9的濃度明顯減少（P＜0.05）

6、。OX-LDL(20μg/ml)組與OX-LDL(20μg/ml)+槲皮素(10μmol/l)組比較，細胞上清液中MMP-2和MMP-9的濃度差異不具有統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。4.PCR結果顯示:與正常對照組比較，其余各組MMP-2和MMP-9mRNA表達增強，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。與OX-LDL(20μg/ml)組比較，OX-LDL(20μg/ml)+槲皮素(50μmol/l)組和OX-LDL(20μg/ml)+槲皮

7、素(100μmol/l)組MMP-2和MMP-9mRNA表達降低，差異具有統(tǒng)計學(P＜0.05)。OX-LDL(20μg/ml)組與OX-LDL(20μg/ml)+槲皮素(10μmol/l)組比較MMP-2和MMP-9mRNA表達差異不具有統(tǒng)計學意義（P＞0.05）5.明膠酶譜結果顯示:細胞培養(yǎng)24小時，與正常對照組相比，其余各組MMP-2和MMP-9的酶活性增加（P＜0.05）。與OX-LDL(20μg/ml)組比較，OX-LDL(2

8、0μg/ml)+槲皮素(50μmol/l)組和OX-LDL(20μg/ml)+槲皮素(100μmol/l)組，MMP-2和MMP-9的酶活性降低(P＜0.05)。OX-LDL(20μg/ml)組與OX-LDL(20μg/ml）+槲皮素(10μmol/l)組比較MMP-2和MMP-9的酶活性差異不具有統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　結論:1.OX-LDL可誘導人臍靜脈血管平滑肌細胞分泌MMP-2/MMP-9增加，并呈時間劑量依賴性