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1、目的:研究轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)和基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP-2)在大鼠行顯微血管吻合術(shù)后動(dòng)脈中膜平滑肌細(xì)胞中的動(dòng)態(tài)表達(dá),探討它們與受損處血管平滑肌細(xì)胞增生、遷移以及細(xì)胞外基質(zhì)代謝沉積的關(guān)系,為術(shù)后預(yù)防和治療吻合口栓塞、血管再狹窄尋找新的作用靶點(diǎn)。 方法:48只雄性Wistar大鼠,頸部正中切口,分離并切斷右側(cè)頸動(dòng)脈,建立顯微動(dòng)脈全層損傷的動(dòng)物模型,手術(shù)顯微鏡下重新行血管吻合。將手術(shù)后大鼠隨機(jī)分為四組,分別于術(shù)后3、7、
2、10、14天收獲血管。同時(shí)取大鼠對(duì)側(cè)正常血管做對(duì)照。每組中4條血管用于組織形態(tài)學(xué)HE染色,光鏡下觀察形態(tài)變化并測(cè)量不同時(shí)間點(diǎn)吻合口處的血管內(nèi)膜和中膜厚度;剩余8條血管應(yīng)用免疫組織化學(xué)的方法,分別檢測(cè)平滑肌細(xì)胞中TGF-β1和MMP-2蛋白的動(dòng)態(tài)表達(dá)。顯微鏡下觀察結(jié)果,統(tǒng)計(jì)陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率。 結(jié)果:1.組織形態(tài)學(xué)觀察:術(shù)后7天血管內(nèi)膜明顯增厚,測(cè)量結(jié)果與對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(t=10.218,P<0.01);術(shù)后14天時(shí)內(nèi)膜增厚達(dá)
3、到高峰(t=19.309,P<0.01)。 2.免疫組織化學(xué)染色:TGF-β1蛋白在術(shù)后3天開始增加(++),與對(duì)照組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=46.62,P<0.01);第7天達(dá)到高峰(+++);術(shù)后14天呈現(xiàn)下降趨勢(shì),與第7天組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=14.65,P<0.05)。 3.免疫組織化學(xué)染色:MMP-2蛋白在正常動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞中呈現(xiàn)基礎(chǔ)表達(dá)(+);術(shù)后第3天MMP-2表達(dá)明顯增高(+++)(x
4、2=52.27,P<0.01);術(shù)后7天組,蛋白表達(dá)呈現(xiàn)逐漸減少的趨勢(shì)(+++~++);術(shù)后10天組及術(shù)后14天組表達(dá)進(jìn)一步降低為(++),與術(shù)后3天組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=6.95,P<0.05)。 結(jié)論:1.TGF-β1在調(diào)節(jié)血管平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移、促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的代謝沉積中發(fā)揮著重要的作用,其表達(dá)變化與損傷血管內(nèi)膜的增生有著密切的關(guān)系。 2.MMP-2作為細(xì)胞外基質(zhì)的主要降解酶之一,可以降解Ⅳ型基底膜膠
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