DNA甲基化抑制劑5-Azacytidine對豬LLC-PK1細胞GDF11表達的影響及豬GDF11的原核表達.pdf

1、生長分化因子11(GDF11)是轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)超家族中的一種分泌型信號分子，又稱為骨形態(tài)發(fā)生蛋白11(BMP11)。從1999年發(fā)現(xiàn)至今，對GDF11的研究主要集中于其在早期胚胎發(fā)育中的調(diào)控作用，特別是在中軸骨骼的圖式形成以及腎發(fā)生中的作用。體長是豬育種中的一個重要的經(jīng)濟性狀，其長短與胸腰椎數(shù)密切相關(guān)。因此，研究DNA去甲基化對豬GDF11表達的影響，對于了解豬體長變異的表觀遺傳機制，具有重要科學(xué)意義和潛在的應(yīng)用價值。

2、 本研究可以分為兩個部分： 第一部分：用DNA甲基化抑制劑5-azaC處理豬腎近端小管上皮細胞系U~-PKl，提取細胞總RNA，運用RT-PCR和半定量PCR的方法分析不同的處理濃度和處理時間對豬GDF11表達的影響。結(jié)果表明：處理24h后0.5、1和3uM5-azaC處理組之間GDF11的相對表達量差異顯著(P<0.05)；處理48h后差異不顯著；處理72h后，0.05、0.1、0.3、0.5、1和3μM 5-azaC處理

3、組之間差異顯著(P<0.05)。在每個處理濃度下，處理24、48和72h后GDF11的相對表達量差異極顯著(P<0.01)。 第二部分：根據(jù)GenBank公布的豬GDF11序列設(shè)計引物，利用來自6.5cm豬胚腎cDNA作為模板，通過PCR的方法克隆編碼豬GDF11蛋白羧基末端327個氨基酸的cDNA序列，將此序列連接入原核表達載體pGEX-6p-1中，測序驗證表明重組質(zhì)粒pGEX-6p-1-GDF11構(gòu)建成功。將重組的表達質(zhì)粒p