NutliN-3a誘導(dǎo)的p73α對結(jié)腸癌細(xì)胞周期阻滯的作用及其作用機制.pdf

1、目的:本項目研究不同劑量Nutlin-3a對內(nèi)源性p73α表達及功能的影響，探討由此產(chǎn)生的對結(jié)腸癌細(xì)胞老化和靜止的作用及其作用機制，為Nutlin-3a用于p53突變及p53缺失的結(jié)腸癌的治療、減少此癌復(fù)發(fā)的可能性提供實驗依據(jù)。
　　方法:人體結(jié)腸癌細(xì)胞株Caco-2(p53基因突變，含野生型p73α基因)，用10％胎牛血清DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)于5％CO2、37℃的潮濕環(huán)境中24h。用含0μM、2.5μM、5μM、10μM、20μM

2、、40μM、60μM及80μM的Nutlin-3a培養(yǎng)液培養(yǎng)Caco-2細(xì)胞72h后，用MTT法檢測Nutlin-3a對Caco-2細(xì)胞的抑制作用;WesternBlot檢測p73α蛋白在Caco-2細(xì)胞中的表達;SA-β-gal染色標(biāo)識出老化的Caco-2細(xì)胞;細(xì)胞集落形成分析檢測Caco-2細(xì)胞在Nutlin-3a撤藥后是否重新增殖。尋找一個濃度范圍的Nutlin-3a所誘導(dǎo)的p73α能引起癌細(xì)胞死亡（凋亡及有絲分裂死亡）及老化，但

3、不引起癌細(xì)胞靜止，而使腫瘤在化療藥物撤除后復(fù)發(fā)的可能性減少，并探索Nutlin-3a引起上述結(jié)果的作用機制。
　　結(jié)果:Nutlin-3a能抑制Caco-2細(xì)胞的生長;Nutlin-3a可以上調(diào)p73α蛋白在Caco-2細(xì)胞中的表達，且有濃度依賴效應(yīng);Nutlin-3a引起結(jié)腸癌老化但不引起其靜止的最佳濃度范圍是5-10μM。
　　結(jié)論:Nutlin-3a可以使P73α蛋白在Caco-2細(xì)胞中的表達加強，且有濃度依賴效應(yīng)。當(dāng)