肌醇六磷酸對人結腸癌細胞系HT-29細胞周期的影響及機制探討.pdf

1、目的：用不同濃度的IP6作用于人結腸癌細胞系HT-29，觀察IP6對癌細胞周期的影響并進行作用機制探討，為研究IP6的抗癌機制提供理論基礎。 方法：將不同濃度的IP6(0mM，1.8mM,3.3mM,5.0mM，8.0mM,13.0mM，)作用于HT-29細胞，分別進行如下研究：1、應用四甲基偶氮唑藍實驗(MTT法)分別觀察IP6持續(xù)作用與間斷作用對癌細胞增殖的影響；2、流式細胞儀檢測不同濃度lP6作用的HT-29細胞的細胞周期

2、變化；3、RT-PCR法檢測IP6對HT-29細胞內cyclinD1、CDK4mRNA表達的影響；4、應用免疫細胞化學法檢測IP6對HT-29細胞內細胞增殖相關基因PCNA、突變型p53蛋白、細胞周期抑制蛋白p21表達的影響 結果：1、不同濃度IP6持續(xù)作用對人結腸癌細胞株HT-29的生長抑制作用結果表明，與對照組相比，各濃度組OD值隨IP6濃度的增加、作用時間的延長均顯著降低(P＜0.05)，顯示IP6持續(xù)作用對結腸癌細胞株的

3、生長具有抑制作用，且具有濃度依賴和時間依賴關系；不同濃度IP6間斷作用對人結腸癌細胞系HT-29生長的增殖抑制作用的實驗結果顯示，在不同作用時間5種濃度IP6作用組的OD值普遍小于對照組(P＜0.05)，但僅在每2天作用24小時的結果顯示出各IP6作用組之間的濃度依賴關系。2、流式細胞儀檢測不同濃度IP6作用對HT-29細胞周期的影響結果顯示，與對照組相比，各IP6濃度組在48小時、72小時兩個時間點，隨著IP6濃度的增高、作用時間的延

4、長，G0-G1期細胞明顯增加(P＜0.01)，而s期、G2/M期細胞明顯降低(P＜0.01)，表現出濃度、時間依賴關系。3、RT-PCR實驗結果顯示，與對照組相比，各濃度組均使cyclinD1、CDK4mRNA表達不同程度降低。4、免疫細胞化學實驗結果顯示，與對照組相比，各IP6濃度組均能抑制突變型p53蛋白的表達(P＜0.05)，上調p21蛋白的表達(P＜0.05)。各IP6作用組均表現出HT-29細胞PCNA的表達降低(P＜0.05

5、)，作用強弱不同，其中3.3～5.0mM濃度組的OD值隨時間延長而降低(P＜0.05)。 結論：IP6對人結腸癌細胞系HT-29細胞周期有G1期阻滯作用，阻止細胞由G1-S期的轉化，并具有濃度、時間依賴關系。其影響細胞周期的作用機制可能為：IP6降低突變型p53蛋白并促進野生型p53的表達，刺激細胞周期抑制蛋白p21的表達；p21競爭性結合cyclinD1/CDK4，抑制CDK4活性，使E2F活性降低，抑制DNA的合成，從而阻止