bFGF促進(jìn)HIE新生仔鼠內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞增殖和分化實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討腹腔注射堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（bFGF）對(duì)缺氧缺血性腦病(HIE)模型新生仔鼠的影響。
　　方法：選孕20日SD大鼠13只隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組10只和對(duì)照組3只，實(shí)驗(yàn)組孕鼠打開腹腔結(jié)扎雙側(cè)子宮動(dòng)脈15分鐘，自然分娩，所分娩為宮內(nèi)全腦缺氧缺血損傷模型組小鼠，對(duì)照組組同樣打開腹腔但不結(jié)扎動(dòng)脈，自然分娩；實(shí)驗(yàn)組仔鼠出生后3日隨機(jī)分為堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子組（bFGF組，n=22）、生理鹽水組（NS組，n=20），對(duì)照組做為正常對(duì)照

2、（n=15）；bFGF組腹腔注射bFGF20ug/kg/d+BrdU50mg/kg/d連續(xù)7天，NS組和對(duì)照組注射等劑量的NS和BrdU同樣7天，監(jiān)測(cè)新生仔鼠D1-D10體重，死亡率，觀察行為、形態(tài)變化；分別在仔鼠出生第一天和注射藥物后一周灌注取腦，石蠟包埋切片，行HE染色觀察神經(jīng)元形態(tài)變化；在各組注射藥物后第2周，行TUN E L法檢測(cè)大腦皮層和海馬區(qū)神經(jīng)元的凋亡；分別在各組注射藥物后第1、2、4周三個(gè)時(shí)間點(diǎn)行免疫組化法檢測(cè)各組皮層區(qū)

3、和海馬齒狀回巢蛋白（Nestin）、5-溴脫氧尿苷（BrdU）、膠質(zhì)纖維酸性蛋白質(zhì)（GFAP）及神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）的表達(dá)；免疫熒光-激光共聚焦法觀察BrdU/Nestin、BrdU/GFAP及BrdU/NSE的共定位表達(dá)。對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組做同期對(duì)照，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
　　結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組胎鼠總數(shù)76只，出生時(shí)活產(chǎn)鼠51只（胎死率32.9％），3日齡時(shí)，活鼠剩余42只，死亡率44.7％，對(duì)照組仔鼠無死亡。實(shí)驗(yàn)組新生仔鼠行動(dòng)笨拙，喂

4、養(yǎng)困難，鼠毛稀疏，四肢肌張力偏高。對(duì)照組體重增長(zhǎng)快，NS組增長(zhǎng)緩慢，bFGF組增長(zhǎng)較快；免疫組化顯示同周齡各組大鼠中對(duì)照組BrdU、Nestin、NSE、GFAP陽性細(xì)胞最少，bFGF組較NS組陽性細(xì)胞表達(dá)增加，組間兩兩比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；共聚焦結(jié)果顯示BrdU與Nestin、NSE、GFAP在大腦皮層與海馬等部位有共定位表達(dá)，皆以bFGF組表達(dá)量最高，對(duì)照組最少；HE染色NS組細(xì)胞數(shù)減少、結(jié)構(gòu)排列紊亂，膠質(zhì)細(xì)胞增生，b