腫瘤源性骨橋蛋白誘導(dǎo)MDSC促進腫瘤免疫逃逸機制研究.pdf

1、髓系抑制性細胞(myeloid-derived suppressor cells，MDSC)是近年來發(fā)現(xiàn)的一群骨髓來源的免疫抑制細胞，大量研究表明其在腫瘤免疫逃逸中發(fā)揮重要免疫調(diào)節(jié)作用，但腫瘤中這群細胞產(chǎn)生的機制尚不清楚。骨橋蛋白(Osteopontin，OPN)是一種磷酸化的分泌型糖蛋白，與腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。有研究認為OPN的功能是多重的，既能影響宿主免疫的細胞功能，又能影響腫瘤侵襲中的轉(zhuǎn)化細胞功能。OPN可以在轉(zhuǎn)錄和翻譯后進行修

2、飾，不同細胞來源的OPN可以有多種多樣的結(jié)構(gòu)特征，從而具備不同的生物學(xué)功能。本研究探討腫瘤來源的OPN對MDSC擴增的影響。
　　 以C57BL/6小鼠脾臟細胞為靶細胞，體外實驗肺癌細胞3LL的上清可有效擴增MDSC的頻率;體內(nèi)實驗小鼠皮下接種肺癌3LL細胞建立小鼠成瘤模型，分析MDSC的表型及功能，結(jié)果顯示肺癌模型小鼠脾臟細胞中MDSC的頻率顯著增加。ELISA檢測3LL細胞上清中OPN的表達水平明顯高于正常肺組織上清。體內(nèi)外

3、實驗中OPN抗體可以有效抑制MDSC頻率的增加。轉(zhuǎn)導(dǎo)短發(fā)卡結(jié)構(gòu)質(zhì)粒shRNA沉默3LL細胞中OPN的表達，轉(zhuǎn)染后的3LL細胞做體內(nèi)外實驗，OPN的下調(diào)抑制了脾臟中MDSC頻率，同時肺癌細胞的成瘤能力明顯下降，腫瘤發(fā)生發(fā)展遲緩，表明腫瘤來源的OPN(T-OPN)具有擴增MDSC的功能，而來源于正常組織的OPN(N-OPN)不具備這種功能。OPN存在四種不同的剪切變體形式，并且不同形式在3LL中水平不同，但對MDSC的擴增作用無顯著差異。實

4、時定量PCR技術(shù)及流式細胞技術(shù)檢測，相較于正常小鼠脾臟細胞，模型組MDSC高表達CD44，并且體外實驗抗CD44抗體阻斷后，MDSC頻率明顯下降，說明T-OPN通過與MDSC表面CD44結(jié)合發(fā)揮作用。通過細胞增殖及凋亡實驗闡明MDSC頻率增加的機制，結(jié)果表明MDSC的通過細胞轉(zhuǎn)化實現(xiàn)擴增。
　　 因此，T-OPN具有擴增MDSC的功能，其作用機制是與MDSC表面CD44結(jié)合發(fā)揮作用，擴增MDSC介導(dǎo)肺癌腫瘤的免疫逃逸。我們的研究