冬葵子抗腫瘤蛋白誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡分子機(jī)制研究.pdf

1、錦葵科植物冬葵在我國(guó)的內(nèi)蒙古、四川、山西、云南等省份均有生長(zhǎng)。其種子冬葵子是它的干燥成熟果實(shí)，在我國(guó)臨床上廣泛應(yīng)用為抗炎藥材。據(jù)“本草綱目”記載，冬葵子歸經(jīng)于大腸經(jīng)和膀胱經(jīng)，它對(duì)消化和泌尿系統(tǒng)有消炎、抗菌作用。雖然冬葵子在中藥抗腫瘤方劑中常常用到，但關(guān)于冬葵子作為抗癌中藥的機(jī)理報(bào)道較少。本研究從冬葵子中分離獲得一種具有抗腫瘤活性的蛋白MSP，并從以下三個(gè)方面探討其分子機(jī)制：
　　第一部分：應(yīng)用蛋白質(zhì)分離純化技術(shù)，從冬葵子中獲得具抗

2、腫瘤活性的單一蛋白，命名為MSP。質(zhì)譜鑒定顯示，MSP與人源性mRNA前體剪切復(fù)合物Pcf11蛋白具有99.729％的同源性。采用MTT法對(duì)其活性進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明MSP能影響人結(jié)腸癌細(xì)胞DLD1和人膀胱癌細(xì)胞T24的存活。
　　第二部分：通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)MSP對(duì)人正常上皮細(xì)胞FHC和癌細(xì)胞DLD1、T24細(xì)胞周期的影響；Western blotting檢測(cè)DLD1細(xì)胞周期相關(guān)蛋白表達(dá)水平。結(jié)果表明，MSP下調(diào)了c-Myc，Cy

3、clin D1和P-Rb蛋白的表達(dá)，誘導(dǎo)癌細(xì)胞DLD1和T24細(xì)胞周期發(fā)生G1期阻滯，但對(duì)FHC細(xì)胞周期沒(méi)有明顯影響。
　　第三部分：通過(guò)流式細(xì)胞儀和DAPI染色法檢測(cè)MSP對(duì)正常細(xì)胞FHC和癌細(xì)胞DLD1、T24細(xì)胞凋亡的影響；采用JC-1染色法觀察MSP處理對(duì)這三種細(xì)胞線粒體膜電位的影響；Western檢測(cè)DLD1細(xì)胞內(nèi)外源性凋亡途徑相關(guān)蛋白的表達(dá)。結(jié)果表明，MSP通過(guò)上調(diào)Fas、FasL,提高caspases-8&3表達(dá)，激