Ahi1基因敲除造成小鼠腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)釋放改變.pdf

1、目的：觀察Ahi1基因敲除(Ahi1 KO)小鼠是否存在抑郁樣表型,進一步探討神經(jīng)遞質(zhì)改變在抑郁樣行為發(fā)生機制中的作用。
　　方法：采用Western blot法測定Ahi1 KO小鼠以及對照小鼠(Ahi1雜合子)腦組織中 Ahi1蛋白的表達水平;利用懸尾實驗(TST)、強迫游泳實驗(FST)、糖水偏好實驗等行為學(xué)實驗觀察Ahi1 KO小鼠是否存在抑郁樣表型;采用高效液相色譜法(HPLC)測定腦組織中五羥色胺(5-HT)、五羥基吲

2、哚乙酸(5-HIAA)、多巴胺(DA)、高香草酸(HVA)、二羥基苯乙酸(DOPAC)、谷氨酸(glutamate)、γ-氨基丁酸(GABA)等神經(jīng)遞質(zhì)的含量;采用 ELISA法測定腦組織單胺類神經(jīng)遞質(zhì)代謝相關(guān)酶單胺氧化酶(MAO)的活性。為研究抗抑郁藥對這種抑郁樣行為是否存在治療作用,將Ahi1 KO小鼠隨機分為2組,實驗組、鹽水組。實驗組給予每天腹腔注射丙咪嗪(20mg/kg體重),鹽水組給予腹腔注射相同劑量生理鹽水,3周后觀察行為

3、學(xué)改變,并應(yīng)用HPLC測定腦組織中神經(jīng)遞質(zhì)的改變。
　　結(jié)果：Western blot結(jié)果顯示:與對照組相比,Ahi1 KO小鼠基本無Ahi1蛋白表達。懸尾實驗和強迫游泳實驗表明 Ahi1 KO小鼠的不動時間較對照組明顯增長(P<0.05)。在糖水偏好實驗中,Ahi1 KO小鼠的總飲水量以及糖水占總飲水量的百分比是明顯降低的(P<0.05)。出生4天的小鼠腦組織中,Ahi1 KO小鼠與對照組的5-HT的含量沒有明顯差別,出生10天

4、、1月、2月的小鼠腦組織中,對照組的5-HT的含量明顯增加(P<0.05),而Ahi1 KO小鼠增加不明顯;同樣DA的水平在出生4天的Ahi1 KO小鼠腦組織中也沒有明顯差別,出生10天及1月的小鼠腦組織中的DA的含量Ahi1 KO小鼠較對照組降低(P<0.05)。出生4天和10天的小鼠腦組織中的谷氨酸和GABA的含量,Ahi1 KO小鼠與對照組相比卻無明顯差別(P>0.05)。取1月齡小鼠不同部位腦組織(杏仁核、海馬、皮層、下丘腦、腦

5、干)進行5-HT和DA等神經(jīng)遞質(zhì)檢測,發(fā)現(xiàn)Ahi1 KO小鼠的腦組織的5-HT及其代謝產(chǎn)物5-HIAA較對照組含量明顯降低(P<0.05),5-HIAA與5-HT的比值(代謝率)則比對照組增高(P<0.05)。同5-HT類似,DA及其代謝產(chǎn)物HVA、DOPAC也觀察到同樣結(jié)果。ELISA法檢測腦組織中腦干MAO的活性結(jié)果顯示Ahi1 KO小鼠的MAO的活性與對照組相比明顯升高(P<0.05)。Ahi1 KO小鼠注射丙咪嗪3周后,在TST

6、、FST中不動時間較鹽水組明顯縮短(P<0.05),五羥色胺的水平較鹽水組升高(P<0.05),而多巴胺的含量卻沒有明顯變化(P>0.05)。
　　結(jié)論：敲除Ahi1基因可在小鼠中造成抑郁樣行為。Ahi1 KO小鼠不同腦組織中抑郁相關(guān)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)如5-HT、DA含量降低,但氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)如谷氨酸、GABA的含量無明顯改變。在Ahi1 KO小鼠腦組織中,MAO的活性增高可能是引起單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量降低的一個原因。丙咪嗪治療可以減