羊傳染性膿皰病毒F1L基因克隆、序列分析及核酸探針的研究.pdf

1、本試驗(yàn)將羊傳染性膿皰病毒(CEV)內(nèi)蒙古分離株(OV-nm-05)經(jīng)犢牛睪丸細(xì)胞增殖培養(yǎng)，提取總DNA。參考GeneBank中Orf Virus(Strain NZ2)株FlL基因序列設(shè)計(jì)一對(duì)測(cè)序引物、一對(duì)診斷引物，應(yīng)用PER技術(shù)特異性地?cái)U(kuò)增出該毒株的FlL基因的片段，并將其克隆到pGEM-Teasy載體后進(jìn)行測(cè)序，得到該病毒FlL基因序列。測(cè)序結(jié)果表明所擴(kuò)增的DNA片段長(zhǎng)1005bp個(gè)核苷酸，包含了完整的FlL基因的和基因兩端的非編碼

2、區(qū)。應(yīng)用計(jì)算機(jī)軟件將測(cè)定序列與參考毒株OV-7、Strain NZ2、OV-C2、OV-mi-90、OV-Torino、OV-20的FlL基因序列進(jìn)行比較。結(jié)果表明羊傳染性膿皰病毒內(nèi)蒙分離株與OV-mi-90同原性最高，達(dá)99.1％，與OV-Torino最低，但也為96.3％。說(shuō)明羊傳染性膿皰病毒內(nèi)蒙分離株FlL基因與其他參考毒株之間差異不大。 用地高辛標(biāo)記FlL基因片段，制備成核酸探針，采用斑點(diǎn)雜交法進(jìn)行特異性和敏感性試驗(yàn)。結(jié)