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1、該實(shí)驗(yàn)在MA104細(xì)胞上培養(yǎng)增殖了豬輪狀病毒(RV)地方分離株JL94,并提取了病毒的雙股RNA.以該RNA為模板,Li-9、Li-11為一對(duì)上、下游引物,Li-12、Li-13為另一對(duì)上、下游引物,通過(guò)RT-PCR分別擴(kuò)增出了大小為1000bpi、1300bp的兩個(gè)片段.將該片段插入T載體中構(gòu)建了重組質(zhì)粒pMD18-T- JL94/VP7和pMD18-T-,JL94/vP6,經(jīng)酶切初步鑒定和序列檢測(cè)證明擴(kuò)增的片段是JL94/VP7(
2、1 062bp),JL94/vP6( 1 356bp)全長(zhǎng)基因,并與國(guó)外參考毒株OSU株、 Gottfried株進(jìn)行了核苷酸和氨基酸序列的比較.JL94/vP7與OSU株VP7核苷酸同源性為99.9﹪,氨基酸同源性為99.9﹪,與GOttfried株VP7核苷酸同源性為74.1﹪,氨基酸同源性為75.4﹪.JL94/vP6與osu株VP6核苷酸同源性為86.85﹪,氨基酸同源性為97.48﹪,與GOttfried株vP6核苷酸序列同源性
3、為82.41﹪,氨基酸序列同源性為93,20﹪.該實(shí)驗(yàn)首次在國(guó)內(nèi)克隆了豬輪狀病毒地方分離株JL94的vP6、vP7全基因并與國(guó)外參考毒株進(jìn)行了序列比較分析,豐富了豬Rv感染的分子流行病學(xué)資料,也為研制豬輪狀病毒基因工程疫苗提供了候選基因:首次在國(guó)內(nèi)構(gòu)建了豬輪狀病毒地方分離株JL94/vP7基因和傳染性胃腸炎地方分離株TH-98/N基因的重組真核表達(dá)載體pcDNA-vP7和pcDNA-N;首次在國(guó)內(nèi)應(yīng)用重組真核表達(dá)載體pcDNA-VP7和
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