豬輪狀病毒和傳染性胃腸炎病毒核酸免疫的研究.pdf

1、該實驗在MA104細胞上培養(yǎng)增殖了豬輪狀病毒(RV)地方分離株JL94,并提取了病毒的雙股RNA.以該RNA為模板,Li-9、Li-11為一對上、下游引物,Li-12、Li-13為另一對上、下游引物,通過RT-PCR分別擴增出了大小為1000bpi、1300bp的兩個片段.將該片段插入T載體中構(gòu)建了重組質(zhì)粒pMD18-T- JL94/VP7和pMD18-T-,JL94/vP6,經(jīng)酶切初步鑒定和序列檢測證明擴增的片段是JL94/VP7(

2、1 062bp),JL94/vP6( 1 356bp)全長基因,并與國外參考毒株OSU株、 Gottfried株進行了核苷酸和氨基酸序列的比較.JL94/vP7與OSU株VP7核苷酸同源性為99.9﹪,氨基酸同源性為99.9﹪,與GOttfried株VP7核苷酸同源性為74.1﹪,氨基酸同源性為75.4﹪.JL94/vP6與osu株VP6核苷酸同源性為86.85﹪,氨基酸同源性為97.48﹪,與GOttfried株vP6核苷酸序列同源性

3、為82.41﹪,氨基酸序列同源性為93,20﹪.該實驗首次在國內(nèi)克隆了豬輪狀病毒地方分離株JL94的vP6、vP7全基因并與國外參考毒株進行了序列比較分析,豐富了豬Rv感染的分子流行病學資料,也為研制豬輪狀病毒基因工程疫苗提供了候選基因:首次在國內(nèi)構(gòu)建了豬輪狀病毒地方分離株JL94/vP7基因和傳染性胃腸炎地方分離株TH-98/N基因的重組真核表達載體pcDNA-vP7和pcDNA-N;首次在國內(nèi)應(yīng)用重組真核表達載體pcDNA-VP7和