羊傳染性膿皰病毒VIR基因的序列分析及PCR檢測(cè)方法的研究.pdf

1、根據(jù)GenBank中已經(jīng)發(fā)表的羊傳染性膿皰病毒毒株NZ2株的VIR基因序列，設(shè)計(jì)合成1對(duì)引物。采用PCR技術(shù)對(duì)內(nèi)蒙古分離株OV/nm-05的VIR基因進(jìn)行特異性擴(kuò)增，然后將其克隆到pEASY-T1載體中。將經(jīng)過PCR鑒定和酶切鑒定后的陽性重組質(zhì)粒進(jìn)行測(cè)序，得到大小為779bp的核苷酸片段，其中完整的VIR基因長(zhǎng)為552bp。序列分析表明，OV/nm-05株與1710/03株同源性最高，達(dá)98.0％，與513/04株的同源性最低，為95.

2、4%，與其他8株參考毒株的同源性都在95.5%以上，說明羊傳染性膿皰病毒各株之間VIR基因的差異不大。
　　用上述引物進(jìn)行PCR退火溫度的優(yōu)化。采用該P(yáng)CR方法對(duì)OV/nm-05株、犢牛睪丸細(xì)胞和山羊痘病毒GVX/nm株的DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，結(jié)果只有OV/nm-05株能擴(kuò)增出相應(yīng)的片段，其余均為陰性，說明該P(yáng)CR反應(yīng)體系具有良好的特異性；對(duì)OV/nm-05株的DNA模板10倍梯度稀釋后進(jìn)行PCR擴(kuò)增，結(jié)果最低可檢測(cè)出38pg的模