ER-α36影響肝癌細胞轉移及營養(yǎng)剝奪耐受性的初步研究.pdf

1、肝細胞癌(Hepatocellular Carcinoma，HCC)是死亡率很高的惡性腫瘤之一。流行病學調查發(fā)現(xiàn)，男性HCC發(fā)病率通常高于女性，即具有顯著的性別差異。提示，雌激素在HCC的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用。雌激素與不同的雌激素受體(Estrogen Receptor，ER)結合可以通過經典的基因組效應，也可以通過快速的非基因組效應參與肝癌的發(fā)生和發(fā)展。雌激素受體不同亞型的表達量也可以作為肝癌細胞惡性轉移的指示因子。肝癌患者死亡的主

2、要原因是肝癌細胞的肝內侵襲及轉移，最終導致肝臟功能衰竭。然而肝癌早期大部分癌細胞并無轉移能力，只有小部分會發(fā)生肝外轉移，因此，研究肝癌細胞轉移能力的改變及機制具有重要意義。
　　 ER-α36是2005年發(fā)現(xiàn)的一種新型雌激素受體亞型，不僅可以定位在質膜上介導雌激素的快速調控作用，還可以轉位至細胞核中通過招募轉錄因子調控靶基因轉錄。實驗室前期研究發(fā)現(xiàn)，ER-α36在正常肝細胞及不同類型肝癌細胞中表達量均有差異，然而其在肝癌發(fā)生發(fā)展

3、中的作用機制并不十分清楚。
　　 本研究以人類原發(fā)性肝癌細胞系SMMC-7721為實驗材料，轉染ER-α36-shRNA干擾質粒，建立ER-α36敲低的細胞模型(7721/Sh36)，采用RT-PCR、Soft agar、Transwell、增殖曲線實驗檢測ER-α36無雌激素作用時在人肝癌細胞增殖、粘附、侵襲、轉移中的作用，通過MTT、Western Blot、熒光素酶報告基因實驗等方法研究ER-α36在雌激素作用時的轉錄活性

4、及其介導激活的信號通路在肝癌細胞中的作用機制，旨在為肝癌臨床研究提供一新的靶標。
　　 結果如下：
　　 1)利用基因干擾技術，建立了ER-α36穩(wěn)定敲低的人肝癌細胞模型7721/Sh36，觀察了雌激素及營養(yǎng)剝奪對細胞存活率的影響，結果發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，ER-α36基因敲低導致細胞營養(yǎng)剝奪耐受性降低，而低濃度血清補充會使細胞存活率升高。
　　 2)ER-α36敲低降低肝癌細胞高濃度雌激素敏感性并介導低濃度雌激素

5、信號通路的激活。ER-α36介導肝癌細胞膜雌激素信號通路的激活，營養(yǎng)剝奪后肝癌細胞死亡率與E2濃度呈線性關系，但敲低ER-α36后線性相關性消失，進一步研究發(fā)現(xiàn)，E2，E2β-BSA及ER-α36特異性激動劑IC162均可激活ER-α36，ER-α36可介導1 nM(低濃度)E2激活MAPK信號通路。
　　 3)ER-α36敲低促進肝癌細胞惡性轉移。與對照組相比，ER-α36敲低后細胞間密度依賴性接觸抑制作用解除，平臺期停留時間