牡荊素對(duì)小鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及部分機(jī)制研究.pdf

1、第一部分：牡荊素的大鼠在體腸吸收特性研究
　　目的：
　　牡荊素是一種黃酮類單體化合物，具有對(duì)抗心肌肥大、抑制血小板聚集、降壓和抗炎等作用。通過大鼠在體單向腸灌流實(shí)驗(yàn)研究牡荊素的腸吸收特性，為牡荊素的劑型制備及臨床安全合理用藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　實(shí)驗(yàn)設(shè)為同一濃度（80μg/ml）牡荊素和牡荊素鼠李糖苷在十二指腸、空腸、回腸和結(jié)腸的段吸收和不同濃度（20、40、80、160μg/ml）牡荊素在空腸段吸收

2、兩個(gè)部分，均運(yùn)用大鼠在體單向腸灌流動(dòng)物模型。分別于灌流后不同時(shí)間段收集腸灌流液，并采用高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定腸灌流液中牡荊素及牡荊素鼠李糖苷的含量，計(jì)算其不同條件下的有效滲透系數(shù)。
　　結(jié)果：
　　1.在同一濃度條件下，牡荊素在4個(gè)腸段均有少量吸收，各腸段之間的有效滲透系數(shù)（Peff）無顯著性差異；牡荊素鼠李糖苷在4個(gè)腸段均有吸收，各腸段之間的Peff無顯著性差異。且在同一腸段牡荊素與牡荊素鼠李糖苷之間的Peff無顯

3、著性差異。
　　2.在不同濃度條件下，灌流液中牡荊素濃度在為20、40、80、160μg/ml時(shí)，其在空腸段的Peff值無顯著性差異。
　　結(jié)論：
　　牡荊素在十二指腸、空腸、回腸和結(jié)腸段的吸收均較差，且無特殊的吸收窗;不同濃度對(duì)牡荊素的吸收無明顯的影響，并且在20μg/ml～160μg/ml的濃度范圍內(nèi)牡荊素的腸吸收不存在自身的濃度抑制作用。
　　第二部分：牡荊素對(duì)小鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及部分機(jī)制

4、研究
　　目的：研究牡荊素對(duì)小鼠局灶性腦缺血再灌注（ischemia/reperfusion,I/R）損傷的保護(hù)作用，并探討其對(duì)小鼠腦缺血再灌注損傷中神經(jīng)元細(xì)胞凋亡及其相關(guān)細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的調(diào)控作用，為牡荊素的臨床應(yīng)用提供理論與實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：健康雄性KM種小鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組（sham）、模型組（I/R）、陽性藥燈盞花素15.00 mg/kg 治療組（BRE）以及牡荊素低劑量（3.25 mg/kg）、中劑量（7.50mg

5、/kg）和高（15.00 mg/kg）劑量三個(gè)治療組，各組均采用線栓法制備小鼠腦缺血再灌注損傷模型。腦缺血2h再灌注22h后，對(duì)各組小鼠采用Long5分法進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分；TTC染色計(jì)算腦梗死體積；HE染色觀察小鼠皮層和海馬CA1區(qū)神經(jīng)元病理改變；Western blot法分別檢測(cè)小鼠缺血側(cè)皮層和海馬組織中ERK1/2、JNK和P38的磷酸化水平及細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2和Bax的表達(dá)。
　　結(jié)果：1.與假手術(shù)組比較，模型組小鼠

6、神經(jīng)功能評(píng)分顯著增加，TTC染色結(jié)果顯示腦梗死體積顯著增加，呈明顯的蒼白色梗死灶。與模型組比較，牡荊素中、高劑量組和燈盞花素組能明顯降低小鼠神經(jīng)功能評(píng)分和腦梗死體積，改善缺血再灌注損傷。2.HE染色結(jié)果顯示，假手術(shù)組小鼠腦組織皮層區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，模型組小鼠缺血側(cè)神經(jīng)元細(xì)胞排列稀松散亂，腫脹，細(xì)胞數(shù)明顯減少，細(xì)胞核固縮，結(jié)構(gòu)及核仁消失。與模型組比較，牡荊素中、高劑量組和燈盞花素組對(duì)小鼠神經(jīng)元細(xì)胞病理損傷均有所改善。海馬CA1區(qū)神經(jīng)元

7、的病理損傷較皮層區(qū)嚴(yán)重。3.與模型組比較，牡荊素中、高劑量組可顯著增加小鼠皮層和海馬組織中p-ERK的表達(dá)。與假手術(shù)組比較，模型組小鼠皮層和海馬組織中p-JNK和p-P38表達(dá)明顯增加，而牡荊素治療組則可顯著降低p-JNK和p-P38的表達(dá)。其中，牡荊素低劑量組對(duì)小鼠皮層組織中p-ERK和p-JNK的表達(dá)無顯著影響，牡荊素低、中劑量組對(duì)p-P38的表達(dá)無顯著影響；牡荊素低劑量組對(duì)小鼠海馬組織中p-ERK的表達(dá)無顯著影響，牡荊素低、中劑量

8、組對(duì)p-JNK和p-P38的表達(dá)無顯著影響。4.與模型組比較，牡荊素中、高劑量組可顯著增加小鼠皮層和海馬組織中Bcl-2的表達(dá)，降低皮層區(qū)Bax的表達(dá)，而在小鼠海馬區(qū)，僅牡荊素高劑量組顯著降低Bax的表達(dá)。
　　結(jié)論：牡荊素對(duì)小鼠局灶性腦缺血再灌注損傷具有良好的保護(hù)作用，可明顯降低小鼠神經(jīng)功能評(píng)分和腦梗死體積，改善神經(jīng)元病理性損傷，其機(jī)制可能是通過調(diào)節(jié)MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及下調(diào)Bax和上調(diào)Bcl-2以抑制神經(jīng)元細(xì)胞凋亡，從而發(fā)揮保