TLR4介導的BV2細胞抗HCV固有免疫應(yīng)答機制初步研究.pdf

1、目的：通過觀察 HCV刺激后小鼠小膠質(zhì)細胞(BV2細胞)TLR4表達變化及其下游細胞因子 IFN-α、IFN-β、IL-6、IL-12分泌變化，進而分析兩者變化的相關(guān)性，初步探討 TLR4是否介導參與中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)抗 HCV固有免疫應(yīng)答及其可能機制。
　　方法：用含20％HCV陽性血清的培養(yǎng)液刺激 BV2細胞，為 HCV實驗組，并設(shè)置正常血清組和空白對照組。應(yīng)用實時熒光定量PCR(RT-qPCR)方法檢測刺激6h、12h、

2、18h、24h后 TLR4mRNA的相對表達；應(yīng)用流式細胞術(shù)(FCM)、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)分別檢測刺激24h后 TLR4蛋白及IFN-α、IFN-β、IL-6、IL-12表達水平；通過觀察 TLR4阻斷后各組細胞 IFN-α、IFN-β、IL-6、IL-12分泌變化分析兩者的相關(guān)性。采用單因素方差分析進行多組均數(shù)的比較，P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)果：在 BV2細胞中有 TLR4 mRNA和TLR4蛋白的表

3、達；HCV實驗組 TLR4 mRNA和TLR4蛋白均高于正常血清組及空白對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，且 HCV實驗組 TLR4 mRNA表達24h內(nèi)呈遞增趨勢；HCV實驗組 IFN-α、IFN-β、IL-6、IL-12分泌明顯高于正常血清組及空白對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；HCV實驗組TLR4阻斷后 IFN-α、IFN-β、IL-6、IL-12分泌明顯減少，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，正常血清組和空白對