

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文檔簡介
1、目的:觀察HCV陽性血清處理后BV-2細(xì)胞TLR2mRNA及蛋白的表達(dá),以及TLR2介導(dǎo)的細(xì)胞因子TNF-α、IFN-α、MCP-1、IL-6、IL-12的表達(dá),初步探討中樞神經(jīng)系統(tǒng)小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞BV-2對HCV陽性血清刺激的免疫反應(yīng),為進(jìn)一步探討TLR2在中樞神經(jīng)系統(tǒng)HCV感染發(fā)病機(jī)制及組織損傷中的作用奠定基礎(chǔ)。
方法:細(xì)胞分為空白對照組、正常對照組及實(shí)驗(yàn)組,分別給予常規(guī)培養(yǎng)用DMEM高糖培養(yǎng)液、含有200mL/L正常血清的
2、DMEM高糖培養(yǎng)液及含有200mL/LHCV陽性血清的DMEM高糖培養(yǎng)液,采用RT-qPCR方法和FCM方法分別檢測各組處理后4h、8h、16h及24hBV-2細(xì)胞TLR2mRNA及蛋白的表達(dá)變化,并應(yīng)用ELISA方法檢測各組細(xì)胞培養(yǎng)上清液中TNF-α、IFN-α、MCP-1、IL-6、IL-12的表達(dá);同時設(shè)TLR2阻斷組及其對照組,首先均給予BV-2細(xì)胞TLR2單克隆阻斷抗體孵育30min后分別給予含有200mL/LHCV陽性血清的
3、DMEM高糖培養(yǎng)液及200mL/L正常血清的DMEM高糖培養(yǎng)液培養(yǎng),24h后收集上清液應(yīng)用ELISA方法檢測TNF-α、IFN-α、MCP-1、IL-6、IL-12的表達(dá)。所有數(shù)據(jù)均采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析,組間和組內(nèi)比較采用單因素方差分析,組間兩兩比較采用LSD分析,以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
結(jié)果:HCV陽性血清處理后BV-2細(xì)胞TLR2mRNA的表達(dá)顯著升高,其4h、8h、16h及24h與空白及正常
4、血清對照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),空白對照組與正常血清對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);
正常BV-2細(xì)胞使用PE標(biāo)記的TLR2單克隆抗體同型對照抗體標(biāo)記后形成熒光峰值,實(shí)驗(yàn)組各時間點(diǎn)BV-2細(xì)胞使用PE標(biāo)記的TLR2單克隆抗體標(biāo)記未形成熒光峰值;HCV陽性血清處理后BV-2細(xì)胞培養(yǎng)上清液中TNF-α、IFN-α、MCP-1、IL-6、IL-12的表達(dá)水平不同,均有不同程度升高,分別與相應(yīng)的對照組比較
5、差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),TLR2蛋白阻斷后細(xì)胞因子TNF-α、IFN-α、MCP-1、IL-6、IL-12的表達(dá)均有不同程度的下降,分別與其對照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),TLR2阻斷對照組與24h(-)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
結(jié)論:BV-2細(xì)胞存在TLR2表達(dá),HCV陽性血清處理可引起B(yǎng)V-2細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變,且TLR2mRNA表達(dá)及細(xì)胞因子表達(dá)發(fā)生變化,提示HCV陽性血清處理可能激
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