TLR2介導(dǎo)的小鼠小膠質(zhì)細胞抗HCV免疫應(yīng)答初探.pdf

1、目的：觀察HCV陽性血清處理后BV-2細胞TLR2mRNA及蛋白的表達，以及TLR2介導(dǎo)的細胞因子TNF-α、IFN-α、MCP-1、IL-6、IL-12的表達，初步探討中樞神經(jīng)系統(tǒng)小鼠小膠質(zhì)細胞BV-2對HCV陽性血清刺激的免疫反應(yīng)，為進一步探討TLR2在中樞神經(jīng)系統(tǒng)HCV感染發(fā)病機制及組織損傷中的作用奠定基礎(chǔ)。
　　方法：細胞分為空白對照組、正常對照組及實驗組，分別給予常規(guī)培養(yǎng)用DMEM高糖培養(yǎng)液、含有200mL/L正常血清的

2、DMEM高糖培養(yǎng)液及含有200mL/LHCV陽性血清的DMEM高糖培養(yǎng)液，采用RT-qPCR方法和FCM方法分別檢測各組處理后4h、8h、16h及24hBV-2細胞TLR2mRNA及蛋白的表達變化，并應(yīng)用ELISA方法檢測各組細胞培養(yǎng)上清液中TNF-α、IFN-α、MCP-1、IL-6、IL-12的表達；同時設(shè)TLR2阻斷組及其對照組，首先均給予BV-2細胞TLR2單克隆阻斷抗體孵育30min后分別給予含有200mL/LHCV陽性血清的

3、DMEM高糖培養(yǎng)液及200mL/L正常血清的DMEM高糖培養(yǎng)液培養(yǎng)，24h后收集上清液應(yīng)用ELISA方法檢測TNF-α、IFN-α、MCP-1、IL-6、IL-12的表達。所有數(shù)據(jù)均采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行分析，組間和組內(nèi)比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD分析，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：HCV陽性血清處理后BV-2細胞TLR2mRNA的表達顯著升高，其4h、8h、16h及24h與空白及正常

4、血清對照組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），空白對照組與正常血清對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；
　　正常BV-2細胞使用PE標記的TLR2單克隆抗體同型對照抗體標記后形成熒光峰值，實驗組各時間點BV-2細胞使用PE標記的TLR2單克隆抗體標記未形成熒光峰值；HCV陽性血清處理后BV-2細胞培養(yǎng)上清液中TNF-α、IFN-α、MCP-1、IL-6、IL-12的表達水平不同，均有不同程度升高，分別與相應(yīng)的對照組比較

5、差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），TLR2蛋白阻斷后細胞因子TNF-α、IFN-α、MCP-1、IL-6、IL-12的表達均有不同程度的下降，分別與其對照組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），TLR2阻斷對照組與24h（-）比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。
　　結(jié)論：BV-2細胞存在TLR2表達，HCV陽性血清處理可引起B(yǎng)V-2細胞形態(tài)發(fā)生改變，且TLR2mRNA表達及細胞因子表達發(fā)生變化，提示HCV陽性血清處理可能激