Cobratoxin對小鼠小直徑DRG神經(jīng)元T型鈣電流的影響及其信號轉(zhuǎn)導機制研究.pdf

1、目的：研究泰國眼鏡蛇長鏈神經(jīng)毒素cobratoxin的鎮(zhèn)痛作用及相關離子通道機制。
　　 方法：培養(yǎng)小鼠背根神經(jīng)節(jié)(DRG)神經(jīng)元細胞,利用全細胞膜片鉗技術研究泰國眼鏡蛇長鏈神經(jīng)毒素cobratoxin對小直徑的DRG神經(jīng)元T型鈣電流的作用,并用藥理學方法(使用M型受體,G蛋白,PLC,PKC,PKA等的阻斷劑或抑制劑)研究其信號通路作用機制。采用熱板法,von Frey法,福爾馬林法,醋酸扭體法等行為學方法研究泰國眼鏡蛇長鏈神

2、經(jīng)毒素cobratoxin對小鼠的鎮(zhèn)痛作用。
　　 結(jié)果：我們發(fā)現(xiàn)泰國眼鏡蛇長鏈神經(jīng)毒素cobratoxin能夠劑量依賴性的抑制小鼠小直徑背根神經(jīng)節(jié)(DRG)神經(jīng)元T型鈣電流。Cobratoxin(0.5μM)可逆性地抑制了約22.3％的T型鈣電流。這種抑制作用可以被毒蕈堿膽堿受體(M受體)拮抗劑阿托品和東莨菪堿,或選擇性M4受體拮抗劑托吡卡胺所阻斷,但是,阿片受體拮抗劑納洛酮則不能阻斷這種作用。在內(nèi)液中加入GDP-β-S或者用

3、百日咳毒素(PTX)對DRG細胞進行預處理,可以阻斷泰國眼鏡蛇長鏈神經(jīng)毒素cobratoxin對T型鈣電流的抑制作用。利用強去極化的前置脈沖,我們發(fā)現(xiàn)G蛋白的βγ亞單位沒有參與cobratoxin對T型鈣電流的抑制作用。將DRG細胞用蛋白激酶A(PKA)抑制劑H89孵育,或者在內(nèi)液中加入PKI6-22,能夠阻斷cobratoxin對T型鈣電流的抑制作用,然而抑制蛋白激酶C(PKC)或磷脂酶C(PLC)則沒有這種作用。鞘內(nèi)注射cobrat