二甲雙胍脂質(zhì)微泡的制備及聯(lián)合表阿霉素抗腫瘤作用研究.pdf

1、目的:以二甲雙胍為模型藥物，脂質(zhì)微泡為載體，構(gòu)建二甲雙胍脂質(zhì)微泡肺腺癌靶向遞送給藥系統(tǒng)，并考察二甲雙胍脂質(zhì)微泡凍干粉的穩(wěn)定性及適當(dāng)?shù)膬?chǔ)存條件;選取肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549檢測(cè)二甲雙胍脂質(zhì)微泡聯(lián)合表阿霉素對(duì)肺腺癌細(xì)胞的增殖、細(xì)胞周期循環(huán)及凋亡等方面的影響，從細(xì)胞水平評(píng)價(jià)體系的有效性;研究二甲雙胍脂質(zhì)微泡對(duì)人肺腺癌裸鼠移植瘤抑制的影響，進(jìn)一步評(píng)價(jià)其體內(nèi)抑癌作用效果和體內(nèi)的組織分布。
　　材料與方法:以提供的空白脂質(zhì)微泡為載體，將二甲雙胍結(jié)

2、合到脂質(zhì)微泡上，經(jīng)過冷凍干燥處理得到凍干粉，即制備得到攜載二甲雙胍的脂質(zhì)微泡;利用光學(xué)和電子顯微鏡、激光粒度儀、黏度分析儀等對(duì)二甲雙胍脂質(zhì)微泡進(jìn)行初步的質(zhì)量評(píng)價(jià);二甲雙胍脂質(zhì)微泡干預(yù)人肺腺癌A549細(xì)胞48h后，采用MTT法檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞增殖的影響，熒光顯微鏡攝取實(shí)驗(yàn)檢測(cè)聯(lián)合二甲雙胍脂質(zhì)微泡的化療方案能增加細(xì)胞對(duì)化療藥物表阿霉素的吸收;建立肺腺癌裸鼠皮下移植瘤模型，表阿霉素溶液?jiǎn)嗡幗M和聯(lián)合二甲雙胍脂質(zhì)微泡化療藥物組，測(cè)定載藥體系對(duì)裸鼠皮下

3、肺腺癌移植瘤的腫瘤抑制率，HE染色觀察移植瘤及裸鼠各臟器的形態(tài)學(xué)特征的變化。結(jié)果:本課題制備的脂質(zhì)微泡凍干粉呈白色疏松粉末狀，加入生理鹽水溶液，振搖后形成脂質(zhì)微泡混懸液，全部溶解需要20-30s，100倍顯微鏡下，其微泡形狀圓整、粒徑較均勻，無聚集;血球計(jì)數(shù)儀測(cè)得微泡濃度為5.8×108/ml至6.7×108/ml之間，大概有90％的粒徑在2μm至6μ m之間，馬爾文激光粒度儀測(cè)定粒徑平均值為3.26μ m，粒徑成正態(tài)分布;二甲雙胍脂質(zhì)

4、微泡干預(yù)人肺腺癌A549細(xì)胞干預(yù)48h后，二甲雙胍脂質(zhì)微泡聯(lián)合表阿霉素組較表阿霉素單藥組相比，人肺腺癌A549細(xì)胞的增殖受到明顯抑制，且該抑制作用呈藥物濃度依賴性增加;熒光下及攝取實(shí)驗(yàn)觀察同濃度下，二甲雙胍脂質(zhì)微泡聯(lián)合表阿霉素組的熒光強(qiáng)度要強(qiáng)于表阿霉素單藥組(P＜0.05);對(duì)肺腺癌裸鼠腫瘤抑制率，二甲雙胍脂質(zhì)微泡聯(lián)合表阿霉素組與表阿霉素溶液組分別為(86.79±3.13)％，(67.55±3.61)％;表阿霉素在心臟的聚積量，二甲雙胍

5、脂質(zhì)微泡聯(lián)合表阿霉素組顯著低于表阿霉素溶液組(P＜0.05)。
　　結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)制備的二甲雙胍脂質(zhì)微泡處方設(shè)計(jì)合理，制作簡(jiǎn)單，質(zhì)量安全穩(wěn)定，為聯(lián)合表阿霉素抗腫瘤治療研究提供重要的制劑基礎(chǔ);體外實(shí)驗(yàn)表明二甲雙胍脂質(zhì)微泡可促進(jìn)表阿霉素對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞體外的增殖抑制，可能機(jī)制為二甲雙胍脂質(zhì)微泡促進(jìn)表阿霉素在特定細(xì)胞內(nèi)積聚、吸收，而且兩者具有協(xié)同抗腫瘤作用;進(jìn)一步動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明二甲雙胍脂質(zhì)微泡聯(lián)合表阿霉素不僅增強(qiáng)表阿霉素對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的抗