鎘對肝癌細(xì)胞SMMC7721的毒性機理研究.pdf

1、揚州大學(xué)博士學(xué)位論文鎘對肝癌細(xì)胞SMMC7721的毒性機理研究姓名：陳大偉申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：臨床獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：劉宗平2011052揚州大學(xué)博士學(xué)位論文ROS、GSH及MDA含量；同時檢測了NAC對鎘致肝癌細(xì)胞凋亡及LDH釋放的影響。結(jié)果表明，ROS升高主要發(fā)生在染毒后2h，顯著或極顯著高于對照組(Po05或P001)；染毒12h時，10和20rtmol／L染毒組細(xì)胞內(nèi)GSH含量極顯著低于對照組(尸o01)；20Imaol／L劑量

2、組MDA含量顯著高于對照組(尸O05)。染毒24h時，GSH隨鎘濃度增高而降低，顯著或極顯著低于對照組(P005或P001)；MDA含量則隨鎘染毒濃度升高而升高，并極顯著高于對照組(P001)。與染毒組比較，在鎘染毒同時添加NAC能顯著降低細(xì)胞上清中LDH活性，減少凋亡細(xì)胞比例。表明氧化應(yīng)激在鎘致肝癌細(xì)胞損傷過程中發(fā)揮了重要作用。3鎘對肝癌細(xì)胞SMMC7721線粒體的影響1、25、5、10、20xmol／L醋酸鎘處理SMMC7721細(xì)胞

3、，測定了染毒12h和24h后線粒體膜電位的變化，觀察了染毒24h線粒體超微結(jié)構(gòu)，同時對線粒體損傷相關(guān)基因Bcl2、Bax、CytC、Caspase9、Caspse3的mRNA相對表達水平及蛋白表達水平的變化進行了測定。結(jié)果表明，染毒12h線粒體膜電位變化不顯著，染毒24h5amoFL以上組線粒體膜電位顯著或極顯著低于對照組(PO05或P001)。超微結(jié)構(gòu)顯示，隨著鎘染毒濃度的增加線粒體出現(xiàn)嵴斷裂，空泡化，嚴(yán)重時發(fā)生崩解。Bel2mRNA

4、相對表達量隨染毒濃度增加而降低，bax表達變化與之相反，Westernblot結(jié)果呈現(xiàn)同樣的變化規(guī)律；細(xì)胞免疫組織化學(xué)檢測Cytc表達隨染毒濃度升高表達量增加，Westernblot檢測無差異；Caspase9mRNA相對表達量隨染毒濃度升高而增加，并顯著高于對照組(腳01)。10ttmol／LCd組Caspse一3mRNA相對表達量顯著低于對照組(P005)，其余染毒組與對照組比較無顯著差異(胗005)。表明線粒體凋亡途徑參與了鎘致肝

5、癌細(xì)胞的損傷。4鎘致肝癌細(xì)胞SMMC7721損傷的蛋白質(zhì)組學(xué)研究選擇10pmol／LCd染毒24h建立鎘致肝癌細(xì)胞損傷模型，通過提取細(xì)胞總蛋白和雙向凝膠電泳對蛋白質(zhì)進行分離，共有24個蛋白點出現(xiàn)顯著的差異表達，包括7個新增點，11個上調(diào)點，6個下調(diào)點。采用MALDITOFMS質(zhì)譜法對24個差異表達蛋白點進行質(zhì)譜分析，結(jié)果成功鑒定了23個蛋白點，對應(yīng)23種蛋白質(zhì)。它們是肽酰脯氨酰順反式異構(gòu)酶FKBP4、角蛋白8、熱休克蛋白27、蛋白酶激活