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1、磁性復(fù)合微粒是由高分子或無機材料與磁性超細粉末(如鐵的氧化物、鐵、鈷、鎳等金屬)構(gòu)成的具有超順磁性的膠態(tài)復(fù)合材料。近年來,結(jié)合磁性氧化物粒子和膠體金特點,F(xiàn)e3O4/Au組成的無機·無機磁性復(fù)合微粒(簡稱金磁微粒)成為研究熱點。由于具有粒徑小,比表面積大,超順磁性及可修飾生物分子等特性,借助外加磁場的使用,這種新型磁性復(fù)合微粒已被用于免疫學(xué)檢測、酶的固定化、蛋白分離等領(lǐng)域。以課題組自主研制的金磁微粒為載體,本文建立了全血基因組DNA純化
2、方法,并對相關(guān)問題進行系統(tǒng)探討。 以人全血、豬血、大鼠血液等為樣本,通過對純化過程中裂解條件、結(jié)合體系、金磁微粒用量及非特異性吸附雜質(zhì)的清洗、DNA洗脫等環(huán)節(jié)的優(yōu)化,,建立了從哺乳動物全血中純化基因組DNA的方法。通過紫外吸收檢測、電泳分析、PCR擴增等手段對方法的可靠性(包括得率、純度、批內(nèi)差、批間差等)進行了評價,證實純化得到的DNA可滿足PCR擴增實驗的要求。此外,以雞血為樣本,對純化體系進行適當?shù)恼{(diào)整,建立了禽類動物全
3、血基因組DNA純化方法。結(jié)果表明:從100μL人全血中可純化得到基因組DNA為2~5μg,從5μL雞全血中可得到基因組DNA約20μg,其A260/280值均在1.70~1.90之間,純化所得DNA分子結(jié)構(gòu)完整;同一批次金磁微粒純化得到DNA得率批內(nèi)差小于7%,三個不同批次金磁微粒純化得到DNA得率的批間差小于20%。整個純化過程可在50 min內(nèi)完成,操作簡單、不涉及酚,氯仿等有毒試劑,可與國外同類純化方法相媲美。 在金磁微
4、粒為載體的DNA純化體系建立過程中,發(fā)現(xiàn)存在一定的背景值,即以超純水替代血樣完成的操作過程,其洗脫液在260 nm處亦有較小特征吸收,對比發(fā)現(xiàn)國外同類產(chǎn)品也存在不同程度的背景值。據(jù)此,對產(chǎn)生背景的主要原因作了分析,結(jié)果表明,金磁微粒組成中的表面鐵的組分和洗脫液中的EDTA形成金屬螯合物的反應(yīng)可能是導(dǎo)致背景值的主要原因,升高溫度可以加速該反應(yīng)。對比Fe3O4磁粒和金磁微粒,結(jié)果表明單純Fe3O4磁粒的空白背景(在260 nm處吸收峰)是金
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