α硫辛酸對(duì)阿爾茨海默病模型大鼠海馬區(qū)PKa-CREB信號(hào)通路的影響.pdf

1、目的:阿爾茨海默病(Alzheimer'sdisease，AD)是一種年齡相關(guān)的癡呆，也是目前神經(jīng)退行性疾病及癡呆的最常見原因。典型臨床表現(xiàn)為緩慢進(jìn)展的記憶力、認(rèn)知功能障礙和行為損害。AD特征性的病理改變是在大腦皮質(zhì)和海馬區(qū)域的細(xì)胞外出現(xiàn)以β-淀粉樣蛋白(beta-amyloid,Aβ)為核心的老年斑(SenilePlaque，SP)、細(xì)胞內(nèi)神經(jīng)原纖維纏結(jié)(NeurofibrillaryTangle，NFT)以及選擇性的神經(jīng)元缺失。隨著

2、當(dāng)今我國(guó)人口老齡化的加速，AD的發(fā)病率逐年增長(zhǎng)，研究新的治療靶點(diǎn)和治療方法具有十分重要的意義。
　　 依賴于cAMP的蛋白激酶A(cyclic-AMPdependentproteinkinaseA，PKA)是一種由環(huán)化腺核苷一磷酸(cAMP)激活的蛋白激酶。PKA全酶分子是由四個(gè)亞基組成的四聚體，分別是兩個(gè)調(diào)節(jié)亞基(regulatorysubunit，R亞基)和兩個(gè)催化亞基(catalyticsubunit，C亞基)。PKA在哺

3、乳動(dòng)物組織中已發(fā)現(xiàn)R亞基包括RⅠα，RⅠβ，RⅡα，RⅡβ，C亞基包括Cα，Cβ，Cγ等多種亞型。cAMP與調(diào)節(jié)亞基結(jié)合，改變調(diào)節(jié)亞基構(gòu)象，使調(diào)節(jié)亞基和催化亞基解離，釋放出催化亞基。被激活的游離催化亞基進(jìn)入胞核，使cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(cAMP-responseelementbindingprotein，CREB)絲氨酸133磷酸化，磷酸化的CREB(Phosphor-CREB)與cAMP反應(yīng)元件(cAMPresponseeleme

4、nt，CRE)結(jié)合直接或間接激活相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，進(jìn)而表達(dá)某些蛋白分子如bcl-2以及某些神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子如腦源性神經(jīng)生長(zhǎng)因子(BrainDerivedNeurotrophicFactor，BDNF)等，從而抑制凋亡，促進(jìn)細(xì)胞的分化再生，細(xì)胞損傷后的修復(fù)等。
　　 目前能有效延緩AD的藥物屈指可數(shù)，研發(fā)治療AD的新的、更有效的藥物成為熱點(diǎn)。α硫辛酸(Alpha-LipoicAcid,α-LA)是一種獨(dú)特的氧化-還原雙向的氧化應(yīng)激的強(qiáng)效

5、抑制劑，它主要通過清除自由基，螯合金屬離子，再生其他抗氧化劑而來發(fā)揮其抗氧化作用。
　　 本實(shí)驗(yàn)旨在通過建立AD大鼠模型，檢測(cè)AD大鼠海馬中PKAⅡα、p-CREB的表達(dá)水平，同時(shí)觀察α硫辛酸對(duì)AD大鼠海馬中PKAⅡα、p-CREB表達(dá)的影響，進(jìn)而探討α硫辛酸對(duì)于中樞神經(jīng)系統(tǒng)損害可能的保護(hù)作用及其機(jī)制，為臨床治療提供更為有利的理論依據(jù)。
　　 方法:將SD大鼠按隨機(jī)數(shù)字表分為4組，即正常對(duì)照組（6只）、假手術(shù)組（6只）、

6、模型組（6只）、α硫辛酸組（6只）。采用雙側(cè)海馬一次性注射Aβ1-42的方法建立AD大鼠模型。α硫辛酸組給予腹腔注射α硫辛酸100mg/kg·d，正常對(duì)照組、假手術(shù)組、模型組給予等體積的生理鹽水腹腔注射，1次/日。治療21天后，采用Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)測(cè)試各實(shí)驗(yàn)組大鼠潛伏期的變化，來觀察α硫辛酸組對(duì)大鼠水迷宮潛伏期的影響，同時(shí)采用WesternBlot方法檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組大鼠腦海馬組織中PKAⅡα、p-CREB蛋白表達(dá)情況。
　　

7、 結(jié)果:
　　 1、各組大鼠Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)潛伏期及穿越平臺(tái)次數(shù)比較
　　 ①在定位航行實(shí)驗(yàn)中，正常對(duì)照組、假手術(shù)組和α硫辛酸組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物大鼠的潛伏期五天內(nèi)均有明顯下降趨勢(shì)，而模型組大鼠潛伏期的下降不明顯;模型組與假手術(shù)組比較，大鼠的逃避潛伏期明顯延長(zhǎng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);α硫辛酸組與模型組比較，大鼠的逃避潛伏期明顯縮短(P＜0.01)，說明α硫辛酸可以明顯改善實(shí)驗(yàn)性AD模型大鼠的學(xué)習(xí)記憶障礙;假手術(shù)組

8、與正常組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05）。②在空間探索實(shí)驗(yàn)中，模型組與假手術(shù)組比較，大鼠跨越平臺(tái)的次數(shù)減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);α硫辛酸組與模型組比較，大鼠在記憶平臺(tái)方面的能力有顯著提高(P＜0.01);假手術(shù)組與正常組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　 2、大鼠海馬組織中WesternBlot檢測(cè)PKAⅡα、p-CREB蛋白水平比較
　　 與假手術(shù)組比較，模型組中大腦海馬組織中PKAⅡα

9、、p-CREB蛋白水平表達(dá)明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);與模型組相比，α硫辛酸組大鼠海馬PKAⅡα、p-CREB蛋白水平表達(dá)明顯增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01）。假手術(shù)組與正常對(duì)照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05）。
　　 結(jié)論:雙側(cè)海馬一次性注射Aβ1-42制備的大鼠模型成功的模擬了AD的行為學(xué)特征。海馬神經(jīng)細(xì)胞中PKA-CREB信號(hào)通路參與了AD大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的過程。α硫辛酸能夠有效的減輕AD大鼠海馬神