吳茱萸堿對(duì)體外誘導(dǎo)分化的小鼠骨髓來(lái)源樹突狀細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的影響.pdf

1、目的：研究吳茱萸堿對(duì)小鼠骨髓來(lái)源的樹突狀細(xì)胞生物學(xué)功能的影響,從調(diào)控樹突狀細(xì)胞功能和細(xì)胞因子分泌的角度來(lái)探討吳茱萸堿的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制及作用靶點(diǎn),為全面開發(fā)和應(yīng)用吳茱萸堿提供理論依據(jù)。
　　 方法：⑴分離BALB/c小鼠骨髓細(xì)胞,經(jīng)GM-CSF體外誘導(dǎo)培養(yǎng)7天的iDC和經(jīng)LPS刺激的mDC,通過(guò)倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)、流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞表面分子表達(dá)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行鑒定和MTT法檢測(cè)混合淋巴反應(yīng)中DC刺激同種異基因淋巴細(xì)胞增殖情況。⑵iDC

2、和mDC經(jīng)EVO處理24 h后,MTT法檢測(cè)其在24、48和72 h時(shí)刺激同種異基因淋巴細(xì)胞增殖情況。⑶iDC和mDC經(jīng)EVO處理24 h后,抗體芯片技術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞上清液中細(xì)胞因子的分泌情況。⑷iDC和mDC經(jīng)EVO處理24 h后,ELISA檢測(cè)各組細(xì)胞上清液中IL-13和Eotaxin-2的含量。⑸mDC組和EVO+LPS組經(jīng)抗IL-13中和抗體處理后,對(duì)其刺激同種異基因淋巴細(xì)胞增殖的影響。
　　 結(jié)果：①倒置顯微鏡下觀察細(xì)

3、胞符合典型DC形態(tài)學(xué)特征:混合淋巴反應(yīng)中,mDC組吸光度值明顯高于iDC(P<0.05)；經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)DC(CD11c+細(xì)胞)百分含量≥90％,mDC組表面標(biāo)志物I-A/I-E、CD40、CD80、CD86明顯高于iDC組。②LPS組與對(duì)照組比較,LPS組吸光度值顯著高于對(duì)照組(P<0.05):EVO+LPS組與EVO組相比,EVO+LPS組吸光度值顯著高于EVO組(P<0.05)；EVO組與對(duì)照組相比,EVO組吸光度值顯著高于對(duì)照

4、組(P<0.05)；EVO+LPS組與LPS組相比,EVO+LPS組吸光度顯著高于LPS組(P<0.05)。在24h、48h、72h的實(shí)驗(yàn)中,均明顯表現(xiàn)出這種趨勢(shì)。③LPS組與對(duì)照組相比較,上調(diào)大于2倍的細(xì)胞因子有14個(gè),下調(diào)大于2倍細(xì)胞因子有1個(gè)；EVO組與對(duì)照組比較,上調(diào)大于2倍的細(xì)胞因子有7個(gè)；EVO+LPS組與LPS組相比較,上調(diào)大于2倍細(xì)胞因子有2個(gè)。④ELISA檢測(cè)各組細(xì)胞上清液中Eotaxin-2和IL-13的含量,EVO

5、+LPS組與LPS組比較,EVO+LPS組Eotaxin-2和IL-13的含量均明顯高于LPS組(P<0.05)；EVO組與對(duì)照組相比,EVO組的Eotaxin-2的含量明顯高于對(duì)照組(p<0.05),IL-13的含量增高不明顯(p>0.05)。⑤EVO+LPS組與anti-IL-13-EVO+LPS組相比,EVO+LPS組吸光度明顯增高(P<0.05)。
　　 結(jié)論：⑴分離BALB/c小鼠骨髓細(xì)胞,經(jīng)GM-CSF體外誘導(dǎo)培養(yǎng)7

6、天可以獲得大量穩(wěn)定的高純度DC,為進(jìn)一步研究樹突狀細(xì)胞的特性和功能提供足量的實(shí)驗(yàn)材料。⑵EVO促進(jìn)了iDC和mDC抗原提呈功能,隨著時(shí)間的推移,DC和經(jīng)EVO處理的DC抗原提呈能力逐漸增強(qiáng)。⑶經(jīng)EVO處理后,DC分泌細(xì)胞因子的功能在成熟和非成熟階段都發(fā)生了明顯改變,其中EVO作用后的mDC上清中Eotaxin-2和IL-13明顯上調(diào)。這些細(xì)胞因子影響著DC的抗原攝取、遷移、抗原提呈以及自身分化成熟,為進(jìn)一步尋找藥物靶點(diǎn)提供了線索。⑷經(jīng)過(guò)