厄貝沙坦對大鼠急性心肌梗死后血清內皮素-1和腦鈉肽的影響及二者動態(tài)變化的研究.pdf

1、目的:隨著人類生活方式的改變,冠心病現(xiàn)已成為危害人類健康的主要疾病之一。急性心肌梗死(Acute myocardial infarction,AMI)發(fā)生后,心臟的收縮和舒張功能受到損害,進一步惡化則會出現(xiàn)心力衰竭,是造成死亡的主要因為。近年來,研究發(fā)現(xiàn)心肌梗死后神經內分泌系統(tǒng)的激活,在其向心衰發(fā)展過程中起到了重要的作用,其特征為交感神經(Sympathetic nervous system,SNS)和腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(Re

2、nin—angiotensin—aldosterone-system,RAAS)激活、腦鈉肽(Brainnatriuretic peptides,BNP)激活、細胞激素與免疫網(wǎng)絡激活以及一系列旁分泌-自分泌反應激活。神經內分泌系統(tǒng)適度激活在短期可以維持循環(huán)與重要器官的灌注,過度激活或長期活性增高則助長心肌重構和心室重塑持續(xù)進行、心室前、后負荷增高,最終導致心力衰竭發(fā)生。因此,探討急性心肌梗死后神經內分泌系統(tǒng)激活和演變規(guī)律,對于心肌梗死的

3、積極診治及預防具有重要的意義。厄貝沙坦(Irbesartan,Irb)作為血管緊張素Ⅱ(AngiotensinⅡ receptor,AngⅡ)受體拮抗藥,已經證實其選擇性與AngⅡ受體中的1型(AT1)結合,阻斷AngⅡ介導的血管收縮、水鈉潴留及醛固酮分泌等,能有效地抑制RASS的激活所帶來的心肌細胞增生,能夠延遲或逆轉心室重塑,明顯縮小心衰后增大的心腔,進而提高左室射血分數(shù),改善心功能。作為神經內分泌系統(tǒng)中重要的成員的BNP和內皮功能

4、在AMI中有重要而又獨特的作用。本研究旨在通過動物實驗了解AngⅡ受體拮抗藥Irb對AMI后大鼠血漿中內皮素-1(Entothelin-1,ET-1)和BNP兩種體液因子的影響以及上述兩種因子的變化規(guī)律,探討心肌梗死診治中的新途徑。
　　 方法:Wistar大鼠30只,13—16周齡,體重230-270克,均為雄性。術前大鼠被隨機分為①對照組(sham group,n=1.0)；②單純心肌梗死組(AMI group,n=10)③

5、心肌梗死+厄貝沙坦組(AMI+Irb group,n=10)。手術過程:大鼠經10％水合氯醛麻醉(35mg/kg腹腔內注射)后,固定于手術臺上。行氣管插管并連接呼吸機,見大鼠胸廓隨呼吸機頻率起伏后證明插管成功。設定呼吸參數(shù)。75％酒精消毒切口部分,于胸骨左側做與胸骨平行的縱形切口,約1-1.5cm。分離打開各層肌肉,暴露心臟,擠破心包,迅速彈出心臟,暴露心臟的左室游離壁。在左心耳與肺動脈圓椎之間找到左冠狀動脈,在動脈起始點下方2—3mm

6、處,用6—0號絲線結扎左冠狀動脈前降支,結扎深度0.3-0.5mm。將心臟送回胸腔,用注射器抽出胸腔內氣體,以恢復負壓,關閉胸腔,此步驟30秒內完成。術中經肉眼觀察,梗死區(qū)變蒼白為結扎成功的標志?？p合各層肌肉,縫皮,撤呼吸機。對照組只開胸不結扎。術后大鼠保溫,單籠放置,待清醒后再次稱重、編號,按組分籠飼養(yǎng)。以上手術均在無菌條件下進行。嚴格按照以上規(guī)程執(zhí)行操作,以保證結扎部位、結扎操作時間和其他條件的一致性。
　　 AMI+Irb

7、組大鼠于術后將Irb(杭州賽諾菲制藥公司)按10mg/kg立即肌肉注射。以后每日上午按Irb50mg/kg溶于水2ml灌胃。對照組和心肌梗死組均肌注和喂給等容量生理鹽水。
　　 術后開始計時,于6時、12時、18時、24時、3天、5天、7天和14天(第3天到第14天抽血時間為每天上午8:00)分別抽大鼠靜脈血1ml,放于試管中,以3000r/min離心10分鐘,并立即用塑料吸管將上層血清轉移至離心管中,標上組別、鼠號和時間,置于

8、-80℃冰箱保存,于14天時集中測定ET-1和BNP指標。大鼠血清ET-1和BNP濃度測定采用雙抗夾心酶聯(lián)免疫法,試劑購自于美國Rapidbio(RB)公司,酶標儀為河北醫(yī)科大學第一醫(yī)院檢驗科的型號為TECAN的儀器。
　　 所有數(shù)據(jù)用SPSS13.0 for windows軟件包進行統(tǒng)計。大鼠血清ET-1和BNP水平及動態(tài)變化用重復測量設計的方差分析,當總的組間變異F值有意義時,數(shù)據(jù)用SNK(Student—Newman-Ke

9、uls)檢驗以比較各組之間均數(shù)差異。為比較各具體時間點的組間差異,采用單因素方差分析,若F值有意義時,再用SNK檢驗。所有數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標準差(mean±SEM)表示,檢驗水準α=0.05。
　　 結果:
　　 1大鼠血清ET-1和BNP水平的組間比較:AMI組、AMI+Irb組和對照組三組相比,各組間血清ET-1和BNP水平在每個時間點均有明顯差異(各P值均<0.05),其有AMI組>AMI+Irb組>對照組的大小關系

10、。
　　 2各組大鼠血清ET-1和BNP水平的動態(tài)變化:
　　 2.1大鼠血清ET-1水平的動態(tài)變化AMI組和AMI+Irb組大鼠血清ET-1出現(xiàn)一個峰值,但AMI組峰值高且出現(xiàn)早,對照組血清ET-1濃度變化較平坦。(見Fig.1)
　　 2.2大鼠血清BNP水平的動態(tài)變化AMI組大鼠血清BNP呈雙峰分泌,第一峰峰值高于AMI+Irb組,出現(xiàn)時間早,而AMI+Irb組血清BNP濃度只有一個峰值,對照組血清BNP濃

11、度變化較平坦。(見Fig.2)
　　 結論:
　　 1.AMI組大鼠血清ET-1和BNP水平高于對照組,說明血清ET-1和BNP升高參與了AMI后病情演變過程。
　　 2.AMI+Irb組大鼠血清ET-1和BNP水平低于AMI組,說明Irb能改善AMI后血清ET-1和BNP升高的程度,對AMI后病情變化有益。
　　 3.大鼠AMI后血清ET-1迅速升高,于7.8±0.92小時達一高峰(272.12±1.2

12、7pg/ml)后逐漸降低,在第14天時仍高于對照組。大鼠AMI后血清BNP的濃度呈雙峰分泌,在12.6±0.60小時達到第一峰值(412.00±3.95pg/ml),第二峰值(336.58±1.54 pg/ml)出現(xiàn)在第153.60±7.33小時,此后繼續(xù)下降,但在第14天時仍高于對照組。表明在未加任何干預的情況下,大鼠AMI后血清ET-1較短時間內即有唯一峰值,而BNP則存在先后兩個峰值。
　　 4.根據(jù)AMI+Irb組大鼠的