漢防己甲素聯(lián)合5-氟尿嘧啶殼聚糖微球防治實驗性PVR的實驗研究.pdf

1、目的:1.研究Tet與5-Fu對兔眼體外RPE細胞增殖的抑制作用,并探討其抑制兔RPE細胞增殖的作用機制,以期初步評價藥物防治PVR的可行性問題。
　　2.觀察Tet聯(lián)合5-Fu殼聚糖微球(Tet-5-FU-CS-MS)對實驗性兔眼PVR模型的防治效果,研究藥物在眼內的抗炎機制。
　　方法:1.提取培養(yǎng)兔RPE細胞,傳至第四代并鑒定后,選取生長良好的第四代RPE細胞進行試驗。設Tet分為2、5、10、15μg/mL組及空白對

2、照組(1O％FBS-DMEM,含0.5%oDMSO, DMSO終濃度≤1‰,對細胞無毒性作用)。5-Fu為5、10、15、20μg/mL組及空白對照組(同上)。噻唑藍比色(MTT)法檢測兩組藥物對RPE細胞增殖的抑制率,從而測定出增殖抑制率較高而藥物濃度相對較低的最佳有效濃度;流式細胞儀(FCM)檢測最佳有效濃度的兩組藥物及空白對照組作用72h后對RPE細胞周期的影響;流式細胞儀(FCM)檢測最佳有效濃度兩組藥物及空白對照組分別作用24

3、h、48h、72h、96h后對RPE凋亡率、線粒體跨膜電位(ΔΨm)、細胞質內Ca2+濃度、Bax, Bcl-2蛋白表達的影響。
　　2.健康成年青紫藍兔48只,隨機分為A、B、C三組,每組16只兔32眼,建立兔眼外傷性PVR模型,向玻璃體中后部注入藥物,A組注入含有Tet-5-FU-CS-MS的BSS懸浮液0.2ml,B組注入含有5-Fu聚乳酸微球的BSS懸浮液0.2ml,C組注入25mg無藥物殼聚糖微球的BSS懸浮液0.2ml

4、,術后每天觀察眼底變化,必要時行眼科B超檢查直到注藥后第28天,藥效評價按Ryan分級法,觀察各組視網膜脫離的發(fā)生率。分別于術后7天、14天、28天等3個時間點抽取各術眼玻璃體液0.2ml,酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測玻璃體液中TNF-α. IL-1β的含量。
　　成果:1.Tet與5-Fu明顯抑制兔體外RPE細胞的增殖,呈時間和劑量依賴性,除作用96h后,Tet1O、15μg/ml及5-Fu15,20μg/ml之間無統(tǒng)計學意

5、義外,其余各質量濃度及時間點之間的比較均有統(tǒng)計學意義(p＜0.05),分別選取RPE細胞的增殖抑制率較高而藥物濃度相對較低的Tet10μg/ml)組和5-FU(15μg/ml)組進行下面的實驗。Tet與5-Fu兩組RPE細胞在72h時G0/G1(合成前期)細胞明顯增多,與相應空白對照組相比差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05); Tet與5-Fu兩組各時間點RPE細胞凋亡率與相應對照組相比明顯升高,差異均有統(tǒng)計學意義(p＜0.05);隨時間延

6、長實驗組RPE細胞線粒體ΔΨ逐漸降低,與相應對照組相比差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);隨時間延長細胞質內Ca2+濃度逐漸升高,與相應對照組相比差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。Tet(10μg/ml)及5-Fu(15μg/ml)實驗組與相應空白對照組相比,均出現Bax蛋白表達增加,Bcl2蛋白表達下降,Bcl-2/Bax比值下降,兩者比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　2.Tet-5-FU-CS-MS組與5-Fu聚乳酸

7、微球組及空白微球組相比,各時間點視網膜脫離的發(fā)生率明顯降低,其玻璃體液中TNF-α、IL-1B等炎性因子的含量也顯著低于其它兩組,方差分析p＜0.05,差異有統(tǒng)計學意義。
　　結論:1.Tet與5-Fu對體外兔RPE細胞的增生有明顯抑制作用,通過阻斷RPE細胞增生周期,干擾Bcl-2及Bax蛋白表達而誘導RPE細胞凋亡,兩藥聯(lián)用在防治PVR方面具有潛在價值。
　　2.Tet-5-FU-CS-MS顯著降低實驗性兔眼PVR的發(fā)生