雌激素對(duì)大鼠脂肪干細(xì)胞誘導(dǎo)成骨成脂分化影響的研究.pdf

1、雌激素參與骨調(diào)節(jié)代謝及脂肪組織的分布，分解及合成、沉積。中老年女性增齡性變化通常伴隨表現(xiàn)有骨質(zhì)疏松以及雌激素水平的下降，隨之機(jī)體脂肪組織增加造成中心性肥胖。對(duì)于婦女的機(jī)體變化既要考慮性腺功能衰退，也要考慮年齡因素造成的身體機(jī)能的下降。骨脂代謝中的成骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞可能是由同一前體細(xì)胞即干細(xì)胞分化而來(lái)，二者的分化平衡可能受相同因素影響。脂肪干細(xì)胞(adipose-derivedstemcells,ADSCs)由于其自身具備的諸多優(yōu)點(diǎn)成為了

2、近年干細(xì)胞研究的熱點(diǎn)。目前，雌激素和增齡性改變對(duì)大鼠ADSCs誘導(dǎo)分化中的作用尚不清楚。本研究以3月和18月齡雌性SD大鼠來(lái)源的ADSCs為對(duì)象，擬觀察雌激素與增齡性因素對(duì)ADSCs體外增殖及誘導(dǎo)成骨，成脂肪分化能力的影響，探討雌激素與增齡改變?cè)贏DSCs成骨成脂分化調(diào)控平衡中可能的作用。
　　研究?jī)?nèi)容包括：
　　1．脂肪干細(xì)胞的分離，純化培養(yǎng)鑒定：
　　采用密度梯度離心和自然貼壁法分別從3月和18月齡雌性SD大鼠腹股

3、溝脂肪處分離純化培養(yǎng)ADSCs，倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)，流式細(xì)胞儀對(duì)其表面標(biāo)志物進(jìn)行檢測(cè)，具有基質(zhì)干細(xì)胞表面抗原CD29和CD105陽(yáng)性，CD34陰性而排除其為造血干細(xì)胞可能。同時(shí)經(jīng)由成骨，成脂的誘導(dǎo)陽(yáng)性結(jié)果也逆向證實(shí)培養(yǎng)分離的細(xì)胞為ADSCs。
　　2.雌激素對(duì)脂肪干細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的影響：
　　通過(guò)MTT法檢測(cè)不同月齡ADSCs生長(zhǎng)增殖以及雌激素對(duì)其影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，3月齡較18月齡ADSCs生長(zhǎng)增殖能力強(qiáng)，雌激素處理后能促進(jìn)

4、細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖。
　　3.雌激素對(duì)于不同月齡大鼠ADSCs體外誘導(dǎo)成骨分化能力的影響：
　　分別取3月齡和18月齡第三代ADSCs預(yù)設(shè)為（1）單純成骨誘導(dǎo)組，（2）成骨誘導(dǎo)雌激素處理組，含雌激素終濃度為10-7M（3）普通單純培養(yǎng)非誘導(dǎo)組。通過(guò)茜素紅染色及OCN檢測(cè)不同月齡和雌激素處理下ADSCs體外成骨分化的能力。結(jié)果顯示：成骨誘導(dǎo)條件下第21天同月齡雌激素處理組茜素紅染色陽(yáng)性面積大于單純誘導(dǎo)組，相同誘導(dǎo)條件下茜素紅染色陽(yáng)

5、性面積3月齡組大于18月齡組；RT-PCR半定量檢測(cè)顯示成骨誘導(dǎo)下同月齡雌激素組較單純誘導(dǎo)組OCN表達(dá)強(qiáng)烈，相同成骨誘導(dǎo)條件下3月齡組較18月齡組OCN表達(dá)強(qiáng)烈；非誘導(dǎo)組染色及OCN檢測(cè)陰性。結(jié)論：雌激素能增強(qiáng)大鼠ADSCs體外誘導(dǎo)成骨分化能力，其誘導(dǎo)成骨分化能力隨增齡性變化下降。
　　4.雌激素對(duì)于不同月齡ADSCs體外誘導(dǎo)成脂分化能力的影響：
　　方法：分別取3月齡和18月齡第三代ADSCs預(yù)設(shè)為:（1）單純成脂誘導(dǎo)組;

6、（2）雌激素處理成脂誘導(dǎo)組，含雌激素終濃度為10-7M;（3）單純培養(yǎng)非誘導(dǎo)組。油紅O染色及LPL檢測(cè)雌激素處理和不同月齡的ADSCs體外成脂分化能力的區(qū)別。結(jié)果顯示：成脂誘導(dǎo)第5天同月齡雌激素處理組油紅O染色陽(yáng)性面積大于單純誘導(dǎo)組,RT-PCR檢測(cè)雌激素處理組較單純誘導(dǎo)組LPL表達(dá)強(qiáng)烈；相同誘導(dǎo)條件下3月齡組油紅O染色陽(yáng)性面積大于18月齡組，RT-PCR檢測(cè)3月齡組LPL表達(dá)較18月齡組強(qiáng)烈；而單純培養(yǎng)非誘導(dǎo)組油紅染色及LPL檢測(cè)均為