非霍奇金淋巴瘤中ZO-1基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)的研究.pdf

1、研究背景及目的：DNA甲基化是腫瘤早期頻發(fā)事件，高甲基化可導致基因沉默，從而參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。非霍奇金淋巴瘤（NHL）是血液系統(tǒng)惡性腫瘤，目前臨床治療已進入分子靶向治療水平，但對于分期評價、預后監(jiān)測卻仍停留在影像學、細胞形態(tài)學水平，與治療相比較為滯后。于力教授等用RLGS方法篩查出ZO-1基因可能與血液系統(tǒng)惡性疾病相關，它的啟動子區(qū)異常甲基化起到重要作用。ZO-1是一種緊密連接蛋白，它在維持正常胞旁屏障通透性、細胞信號轉導、基因轉錄

2、及調節(jié)細胞增殖分化中發(fā)揮著巨大作用，與腫瘤的分化和浸潤密切相關。前期研究證實其在人白血病細胞系HL60中、自然殺傷細胞系NK92中呈現(xiàn)高甲基化狀態(tài)且失表達，這提示它可能是一個血液系統(tǒng)惡性腫瘤相關的抑癌基因。本文旨在通過研究ZO-1基因在非霍奇金淋巴瘤石蠟標本、骨髓標本中甲基化狀態(tài)及其與分期、分型、緩解間關系，進一步探討其作為通用性基因標記、指導臨床治療的意義。
　　 實驗共分兩部分。
　　 第一部分：
　　 方法

3、：采用甲基化特異性PCR（MS-PCR）方法對29例非霍奇金淋巴瘤及10例反應性增生淋巴結石蠟包埋標本ZO-1基因啟動子區(qū)甲基化狀況進行檢測。結果：（1）29例NHL中17例出現(xiàn)甲基化條帶，2例出現(xiàn)完全非甲基化條帶，10例未出現(xiàn)擴增產(chǎn)物，甲基化陽性率89.4％（17/19），陽性率明顯高于反應性增生淋巴結（0/7）（p<0.05）。（2）4例T細胞型NHL，甲基化陽性4例，陽性率100％，15例B細胞型NHL，甲基化陽性13例，陽性率8

4、6.6％，二者差別無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。T細胞型、B細胞型NHL分別與反應性增生淋巴結比較有統(tǒng)計學差異。（3）共檢測標本39例，其中2年以上標本16例，獲得檢測結果的7例，檢出率43.7％；1-2年標本7例，獲得檢測結果3例，檢出率42.9％；1年以下標本16例，全部獲得檢測結果，2年以上標本與1-2年間標本間檢出率無顯著差別（P>0.05），上述兩組標本與1年以內標本檢出率比較均有顯著性差異（P<0.05）。結論：1、ZO-1

5、基因甲基化在NHL組織中發(fā)生率顯著增高，在各亞型間差別不大，可以作為NHL輔助診斷的通用性基因標記；2、隨著標本制備時間延長檢出率下降，使用較為新鮮的組織，可增加檢測的敏感性、降低假陰性率。
　　 第二部分
　　 方法：采用MS-PCR方法對45例次NHL骨髓、5例特發(fā)性血小板減少性紫癜（ITP）、5例正常人骨髓標本ZO-1基因啟動子區(qū)甲基化狀況進行檢測。結果：（1）骨髓ZO-1基因啟動子區(qū)甲基化狀況：39例初治或復發(fā)或

6、未達到完全緩解的NHL患者中ZO-1基因甲基化陽性21例（陽性率53.85％），而ITP組及正常人組甲基化陽性率均為0％（0/5），NHL患者與ITP及正常人間有統(tǒng)計學差異（P<0.05）；（2）NHL初治、復發(fā)組甲基化陽性率57.14％（16/28），未完全緩解組甲基化陽性率45.45％（5/11），分別與CR組0％（0/6）比較均有統(tǒng)計學差異（P<0.05），而初治、復發(fā)組與未完全緩解組無統(tǒng)計學差異。（3）T、B細胞型NHL間甲基化

7、狀況無統(tǒng)計學差異（P>0.05），而B細胞各亞型以濾泡型淋巴細胞甲基化陽性率高，其次為彌漫大B細胞淋巴瘤、邊緣帶淋巴瘤，最后是套細胞淋巴瘤、Burkitt淋巴瘤。（4）在39例初治或復發(fā)或未達到完全緩解的NHL患者中，28例Ⅲ、Ⅳ期的患者ZO-1基因甲基化陽性18例，陽性率64.29％，11例Ⅰ、Ⅱ期患者ZO-1基因甲基化陽性3例，陽性率27.27％，二者之間差異有統(tǒng)計學意義（p<0.05）。（5）動態(tài)監(jiān)測部分患者甲基化與治療效果關系顯