HLA-G基因RNA干擾和過表達在肝癌細胞中對NK細胞免疫監(jiān)視功能的影響.pdf

1、中山大學(xué)博士學(xué)位論文HLAG基因RNA干擾和過表達在肝癌細胞中對NK細胞免疫監(jiān)視功能的影響姓名：曾憲成申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：陳規(guī)劃20090526l|lIIf大學(xué)搏Ij學(xué)位論文HLAG基㈨RNAT擾_手lI過表達ni肝煽細胞I一對NK細胞免疫l；f視功能的影q國andKIR2DL4受體結(jié)合，從而抑制NK細胞、T細胞及抗原遞呈細胞功能?？扇苄訦LA—G還可以與CD80受體結(jié)合，從而導(dǎo)致NK細胞、T細胞調(diào)亡。HLAG自從1

2、998年首次在腫瘤中檢測到HLA—G轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物以來，大量的研究證實在多種腫瘤組織中檢測到HLA—G轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物及蛋白。由于HLA—G免疫耐受的特性，其在腫瘤中表達被認為足腫瘤免疫逃逸的重要機制。目的l、在mRNA和蚩白水平上，分析HLAG在肝癌細胞系、肝細胞系的表達情況。2、通過RNAi技術(shù)，構(gòu)建HLA—GshRNA載體，在Bel7402細胞建立穩(wěn)定干擾細胞株，在mRNA及蛋白水平‘卜調(diào)的HLAG基因表達。3、通過基因克隆技術(shù)，構(gòu)建HLAG基

3、l大J表達載體，在Hep3B細胞建立穩(wěn)定表達細胞株，在mRNA及蛋白水平上調(diào)的IILA—G基因表達。4、通過上述兩種技術(shù)，探討HLAG基岡在NK介導(dǎo)的肝癌免疫監(jiān)視中的作用。方法1、通過免疫熒光細胞化學(xué)、Real—TimePCR及WesternBIot技術(shù)檢測肝癌細胞系、肝細胞系中HLA_GmRNA水平和蛋白水平的表達情況。2、構(gòu)建pGPU6／GFP／Neo／HLA—GshRNA載體并應(yīng)用雙酶切及測序驗證載體，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染至肝癌Bel一740

4、2細胞，建立穩(wěn)定干擾細胞株，通過RealTimePCR及WesternBlot檢測mRNA及蛋白水平變化。3、構(gòu)建pEGFP—C1一HLA—G載體』：應(yīng)用PCR、雙酶切及測序驗證載體，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Hep3B細胞，建立穩(wěn)定表達HLAG基tl細胞株，通過Real—TimePCR及WesternB10t檢測mltNA及蛋白水平變化。4、LDH法檢測HLAG基因表達對NK92一MI細胞殺傷的影響以及其與NK92MI表面ILT2、KIR2DL4受體相