圓錐角膜組織與正常角膜組織差異蛋白的表達(dá)及其和圓錐角膜發(fā)病關(guān)系的初步研究.pdf

1、圓錐角膜(keratoconus)是一種以角膜擴(kuò)張為特征，致角膜中央部向前呈圓錐形凸起，及產(chǎn)生高度不規(guī)則近視散光和不同視力損害的原發(fā)性疾病。若病變持續(xù)發(fā)展，最終的結(jié)果是行角膜移植術(shù)。所以探明病因及發(fā)病機(jī)制，采取有效的控制手段，是防治圓錐角膜的根本。 目的：運(yùn)用比較蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，比較圓錐角膜組織和正常角膜組織的差異表達(dá)蛋白，篩選出圓錐角膜特異性分子標(biāo)記物，探討其與圓錐角膜發(fā)病機(jī)制的關(guān)系。 方法：收集12例圓錐角膜組織和4

2、例正常人角膜組織，提取角膜組織總蛋白，行固相PH梯度雙向凝膠電泳，分析凝膠電泳圖譜，篩選差異表達(dá)蛋白，采用基質(zhì)輔助激光解吸離子化一串聯(lián)飛行時(shí)間質(zhì)譜(MOLDI-TOF／TOF-MS)和數(shù)據(jù)庫檢索對差異蛋白質(zhì)進(jìn)行鑒定。 結(jié)果： 1、建立了穩(wěn)定性較好、分辨率高的人圓錐角膜組織和正常角膜組織的雙向凝膠電泳圖譜(17cm IPG膠條PH5-8)； 2、圓錐角膜組織和正常角膜組織的雙向電泳代表膠的蛋白點(diǎn)數(shù)分別為1035和1

3、070，匹配點(diǎn)數(shù)為869個(gè)，匹配率為84％。選取有明顯表達(dá)差異的7個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)，其中6個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)在圓錐角膜組織中表達(dá)下調(diào)，1個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)表達(dá)上調(diào)。 3、對7個(gè)差異表達(dá)蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行MALDI-TOF／TOF-MS的鑒定，共獲得7張蛋白質(zhì)點(diǎn)的肽質(zhì)量指紋圖譜(PMF)及二級質(zhì)譜圖(MS／MS)，成功鑒定出的7個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)分別為轉(zhuǎn)化生長因子β誘導(dǎo)的細(xì)胞外基質(zhì)黏附蛋白(TGFBIp／βig-h3)、Ⅵ型膠原蛋白α1鏈前體(collagen al

4、pha-1(Ⅵ)chain precursor)、αA-晶體蛋白(alpha-crystallin A)、αB-晶體蛋白(alpha-crystallin B)、βB2-晶體蛋白(beta-crystallin B2)、谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase)、碳酸酐酶(carbonic anhydrase)，除Ⅵ型膠原蛋白α1鏈前體在圓錐角膜組織中表達(dá)上調(diào)外，其余6個(gè)蛋白成分在圓錐角膜組織中均表達(dá)下調(diào)。 結(jié)論