抵抗素與川崎病患兒冠狀動脈內皮細胞損傷關系.pdf

1、目的：
　　抵抗素近年來被認為與心血管疾病有密切關系，有研究表明，作為新發(fā)現的一種脂肪因子，抵抗素可能起到一種炎癥介質的作用。課題組前期研究發(fā)現川崎病未接受丙球治療患兒尤其是在冠狀動脈損傷患兒血清中抵抗素水平升高，本實驗通過用川崎病患兒血清及抵抗素等刺激人冠狀動脈內皮細胞（HCAEC），模擬川崎病時冠狀動脈內微環(huán)境，研究抵抗素在川崎病患兒冠狀動脈內皮細胞損傷的可能作用及機制。
　　方法：
　　收集正常兒童及川崎病急性期

2、且未經過丙種球蛋白治療血清，無菌處理，以正常血清（N），川崎病血清（KD），川崎病血清加抵抗素抗體（KD+antiRe），抵抗素（Re）（40ng/ml）干預HCAEC24小時，倒置顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)，MTTT法檢測細胞活力，化學比色法檢測一氧化氮（NO）水平，總一氧化氮合酶（TNOS）及誘導型一氧化氮合酶（iNOS）活力，RT-PCR檢測ET-1、iNOS與eNOSmRNA表達水平的變化，WesternBlot檢測iNOS蛋白表達，

3、ELISA檢測iNOS與eNOS蛋白水平的變化。
　　結果：
　　各組HCAEC經不同干預處理24小時后：
　?。?）倒置顯微鏡下觀察細胞，見川崎病血清及川崎病血清加抵抗素抗體干預組細胞數目較少，細胞間隙稍寬，余四組細胞無明顯差別
　?。?）MTT檢測出川崎病血清與川崎病血清加抵抗素抗體組細胞活力下降，余四組無明顯差別；
　　（3）與正常兒童血清組HCAEC相比較，川崎病血清干預組、川崎病血清加抵抗素抗體干

4、預組，抵抗素干預組HCAEC的NO及TNOS、iNOS酶活性升高（p＜0.05）。
　?。?）與正常兒童血清組及川崎病血清加抵抗素抗體組相比較，川崎病血清與抵抗素組HCAECET-1、iNOSmRNA表達升高（p＜0.05）。
　　（5）與正常兒童血清組及川崎病血清加抵抗素抗體組相比較，川崎病血清組與抵抗素組HCAEC干預24小時后，iNOS蛋白表達升高（p＜0.05）。
　　（6）與正常兒童血清組及川崎病血清加抵抗素