AVE3085對ADMA損傷的人冠狀動脈內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用.pdf

1、目的：研究非對稱二甲基精氨酸（asymmetric dimethylarginine,ADMA）對人冠狀動脈內(nèi)皮細(xì)胞（human coronary artery endothelial cells，HCAEC）的損傷作用，并探討內(nèi)皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase,eNOS）增強劑AVE3085對ADMA損傷的HCAEC的保護(hù)作用。
　　方法：原代培養(yǎng)的HCAEC分4個組：對照組、

2、ADMA組、ADMA+AVE3085組、ADMA+DMSO組，在含相應(yīng)藥物的培養(yǎng)基中培養(yǎng)24h后，應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）檢測細(xì)胞中eNOS基因的表達(dá)；應(yīng)用Western-Blot方法檢測細(xì)胞中eNOS和磷酸化eNOS（p-eNOSser1177）蛋白的表達(dá)量；應(yīng)用熒光探針檢測細(xì)胞NO的釋放量和活性氧（reactive oxygen species,ROS）的生成量；應(yīng)用熒光鏡檢和流式細(xì)胞儀計數(shù)檢測細(xì)胞凋亡。
　

3、　結(jié)果：與對照組比較，ADMA使eNOS表達(dá)顯著下調(diào)（F=1041.17，q=80.50，P＜0.01），eNOS和p-eNOSser1177表達(dá)量也隨之下降（F=391.35～432.74，q=23.55～34.62，P＜0.01），NO釋放量降低（F=600.36，q=32.18，P＜0.01），ROS生成增加（F=918.05，q=38.62，P＜0.01），凋亡細(xì)胞的數(shù)量顯著增加（F=126.98～361.55，q=13.60～

4、24.53，P＜0.01）。與ADMA組相比，ADMA+AVE3085可顯著恢復(fù)eNOS-mRNA的表達(dá)（F=1041.17，q=36.83，P＜0.01），上調(diào)eNOS和p-eNOSser1177蛋白的表達(dá)（F=391.35～432.74，q=22.35～35.41，P＜0.01），促進(jìn)NO釋放（F=600.36，q=28.17，P＜0.01），抑制ROS生成（F=918.05，q=34.11，P＜0.01），顯著抑制細(xì)胞凋亡（F=1