皮膚活檢評價(jià)自噬異常調(diào)控參與帕金森病發(fā)病機(jī)制的研究.pdf

1、背景
　　帕金森病(Parkinson'sdisease，PD)又名震顫麻痹，是1817年英國醫(yī)生JamesParkinson最早系統(tǒng)描述的一種中老年人常見的神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病，多在60歲以后發(fā)病。臨床以運(yùn)動遲緩、靜止性震顫、肌強(qiáng)直以及姿勢平衡障礙為特點(diǎn)。其最主要的病理特征是中樞神經(jīng)系統(tǒng)黑質(zhì)致密部多巴胺（Dopamine，DA）能神經(jīng)元的變性缺失以及路易小體(Lewybody)的形成。帕金森病的病因多樣，發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，目前尚未能

2、完全闡明。多數(shù)學(xué)者認(rèn)為PD是環(huán)境因素和遺傳因素共同作用的結(jié)果，環(huán)境中的神經(jīng)毒素、年齡的老化、遺傳導(dǎo)致的突變蛋白等因素均可通過導(dǎo)致線粒體功能障礙、增加細(xì)胞氧化應(yīng)激、泛素-蛋白酶體功能異常等多種機(jī)制誘導(dǎo)多巴胺能神經(jīng)元變性死亡。目前越來越多研究表明自噬功能的失調(diào)在帕金森病的發(fā)病機(jī)制中起到了重要的作用。自噬(autophagy)即為自我吞噬(self-eating)，此過程可有效地降解清除細(xì)胞內(nèi)的病原體、錯(cuò)誤折疊或功能異常的蛋白、受損的細(xì)胞器以

3、及實(shí)現(xiàn)某些重要物質(zhì)的循環(huán)再利用，對維持細(xì)胞的正常功能具有重要意義。自噬包括微自噬(Microautophagy)、巨自噬(Macroautophagy)、以及分子伴侶介導(dǎo)的自噬(Chaperone-mediatedautophagy)三個(gè)獨(dú)立的途徑。自噬參與帕金森病發(fā)病過程的具體機(jī)制目前尚未闡明，其可能機(jī)制包括α-synuclein蛋白的降解清除障礙、過度的線粒體應(yīng)激或者線粒體自噬機(jī)制失調(diào)，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激等多個(gè)方面。PD相關(guān)基因LRRK2、

4、PINK1、parkin、DJ-1也可通過影響自噬功能和/或線粒體功能參與PD的發(fā)病。除此之外，自噬在多種PD模型中均證實(shí)起到保護(hù)多巴胺神經(jīng)元的作用。既往研究多以動物模型、細(xì)胞培養(yǎng)為研究載體，而關(guān)于PD患者在體組織自噬調(diào)控的研究報(bào)道甚少。
　　目的
　　運(yùn)用皮膚活檢術(shù)取材PD患者皮膚，分別從巨自噬以及分子伴侶介導(dǎo)的自噬兩個(gè)方面評價(jià)PD患者皮膚組織自噬水平的變化，初步探討自噬異常調(diào)控在PD發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　方法

5、r>　　1.本研究收集了PD患者23例，以及正常對照組23例，收集PD患者的臨床資料，對PD患者分別進(jìn)行Hoehn&Yahr分級法量表評分，運(yùn)用皮膚活檢術(shù)收集PD患者的皮膚標(biāo)本。
　　2.通過免疫組化法檢測微管相關(guān)蛋白輕鏈3(microtubuleassociatedprotein1lightchain3，LC3)、Beclin-1、組成型熱休克蛋白70(heatshockcognateprotein70，HSC70)、溶酶體相關(guān)

6、膜蛋白2a（lysosome-associatedmembraneprotein2a，LAMP-2a）的表達(dá)，用蛋白質(zhì)印跡法(Westernblot)檢測LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值變化以及Beclin-1、HSC70、LAMP-2a的表達(dá)水平。
　　3.統(tǒng)計(jì)分析:采用SPSS17.0軟件，結(jié)果數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示，應(yīng)用LSD-t檢驗(yàn)或秩和檢驗(yàn)。以p＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1.與正

7、常對照組相比，免疫組化法檢測PD患者皮膚LC3、Beclin-1表達(dá)均上調(diào);Westernblot檢測LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、Beclin-1表達(dá)水平均升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)，說明與正常對照組相比，PD患者皮膚巨自噬水平上調(diào)。
　　2.與正常對照組相比，免疫組化法檢測PD患者皮膚HSC70、LAMP-2a表達(dá)上調(diào);Westernblot檢測HSC70、LAMP-2a表達(dá)水平均升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05