依達(dá)拉奉可經(jīng)Nrf2-ARE通路對(duì)PD小鼠黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元起保護(hù)作用.pdf

1、目的：研究 Nrf2/ARE通路在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氫吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine, MPTP)所致帕金森病(PD)動(dòng)物模型發(fā)病機(jī)制中可能的作用，探討導(dǎo)致多巴胺(DA)能神經(jīng)元變性失活的可能機(jī)制，以及依達(dá)拉奉對(duì)Nrf2/ARE通路的影響和對(duì)多巴胺能神經(jīng)元的保護(hù)作用。
　　方法：健康雄性 C57 BL/6N小鼠共75只，隨機(jī)分為3組，每組25只。1

2、模型組：腹腔注射 MPTP(20mg/Kg，生理鹽水溶)，連續(xù)注射四次，每次間隔2小時(shí)，次日起，每次注射與依達(dá)拉奉（Edravone）干預(yù)組同體積生理鹽水，直至處死。隨機(jī)從模型組中抽取5只于MPTP最后一次注射后處死取材，剩余20只于MPTP最后一次注射后48小時(shí)處死取材。2依達(dá)拉奉干預(yù)劑組：在 MPTP注射前2天開(kāi)始，每天給予依達(dá)拉奉(10mg/Kg,生理鹽水溶)腹腔注射，直至處死。隨機(jī)從依達(dá)拉奉干預(yù)組中抽取5只于第四次注射MPTP后

3、7天處死取材。余下20只于第四次注射MPTP后48小時(shí)處死取材。3對(duì)照組：注射與模型組等量生理鹽水，隨機(jī)抽取5只于第七天取材，剩余小鼠于第48小時(shí)取材。采用免疫組織化學(xué)法觀察各組小鼠黑質(zhì)區(qū)絡(luò)氨酸羥化酶(TH)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量，黑質(zhì)區(qū)Nrf2, NQO1, GFAP和NF-κB免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量變化。采用免疫熒光法觀察各組小鼠 Keap1免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量，采用免疫熒光雙標(biāo)法標(biāo)記 TH和Nrf2，TH和NQO1，比較黑質(zhì)區(qū)TH(tyros

4、ine hudroxylase,TH)免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞和Nrf2、NQO1免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞分布之間的關(guān)系及觀察細(xì)胞數(shù)量的變化。采用免疫印跡法檢測(cè)中腦黑質(zhì)區(qū) TH、Nrf2、NQO1、 GFAP和NF-κB表達(dá)水平的變化。采用計(jì)算機(jī)圖像分析法對(duì)免疫組化染色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，免疫熒光陽(yáng)性細(xì)胞染色強(qiáng)度和免疫印跡特異性蛋白條帶進(jìn)行半定量分析，所有數(shù)據(jù)采用 SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)處理。
　　結(jié)果：與對(duì)照組小鼠相比，

5、所有模型組小鼠均出現(xiàn)典型PD癥狀。在MPTP最后一次注射后48小時(shí)黑質(zhì)區(qū)TH明顯減少，Nrf2、NQO1、GFAP和NF-κB陽(yáng)性細(xì)胞增加(P<0.01)，在 MPTP注射后1周，黑質(zhì)區(qū) TH陽(yáng)性神經(jīng)元顯著丟失約75％(P<0.01)，經(jīng)依達(dá)拉奉干預(yù)處理后，干預(yù)組小鼠 PD癥狀減輕，與模型組比較，依達(dá)拉奉干預(yù)組在MPTP最后一次注射后48小時(shí)，黑質(zhì)區(qū)Nrf2，NQO1和GFAP陽(yáng)性細(xì)胞進(jìn)一步增加(P<0.01)，NF-κB免疫陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)