HO-1調控Nrf2-ARE信號通路對腦出血后神經(jīng)保護作用的實驗研究.pdf

1、目的與背景:
　　腦出血后繼發(fā)的腦組織損傷是影響預后、轉歸的關鍵因素,而炎性因子及自由基的瀑布式產(chǎn)生對腦出血后繼發(fā)性腦損傷起決定性作用。研究發(fā)現(xiàn)血紅素加氧酶-1(HO-1)廣泛在中樞神經(jīng)細胞(神經(jīng)元及膠質細胞)中表達,是Nrf2-ARE信號通路下游一重要抗氧化及解毒蛋白,對腦出血后繼發(fā)性腦損傷具有抗炎性反應、減輕氧化應激損傷、抑制細胞凋亡等神經(jīng)保護作用。本研究運用HO-1的選擇性抑制劑鋅原卟啉-9(ZPP-IX)抑制HO-1表達,

2、觀察用藥后Nrf2-ARE通路上下游蛋白Nrf2、NF-κB等表達的變化并結合神經(jīng)功能評分的差異來探討HO-1對腦出血灶周神經(jīng)保護作用的機制,為腦出血的治療提供新的實驗理論依據(jù)。
　　方法:
　　采用SD雄性大鼠基底節(jié)自體股動脈血注射法建立腦出血模型,分四組:正常組、ICH組、ZPP-IX+ICH組、DMSO+ICH組。通過免疫熒光、Western blot、RT-PCR觀察術后各組不同時間點血腫周圍binding-Nrf2

3、(Nrf2-Keap1)、Nrf2、HO-1、NF-κBp65、TNF-α蛋白及相應mRNA表達變化并結合神經(jīng)功能評分,對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析(單因素方差分析,t檢驗)。
　　結果:
　　ICH組較正常對照組Nrf2、HO-1、NF-κB、TNF-α的表達在術后6h即開始升高,48-72h達峰,至第7天表達量仍高于正常組,而binding-Nrf2的表達在腦出血后12h開始減少,48h減少最明顯。ZPP-IX組與ICH組比

4、較,神經(jīng)功能障礙加重,出血灶周binding-Nrf2、NF-κBp65、TNF-α表達增加,Nrf2、HO-1表達減少,差異在48-72h最明顯,且差異持續(xù)到第7天。DMSO組較ICH組神經(jīng)功能評分及各蛋白表達無明顯差異。
　　結論:
　?、臜O-1在腦出血后早期表現(xiàn)出神經(jīng)保護作用;
　?、颇X出血后6h開始Nrf2-ARE信號通路激活,表現(xiàn)為Nrf2及下游HO-1的表達增多,而這一變化與ICH后腦水腫的高峰時間一致,