4-氨基-2-三氟甲基苯基維甲酸酯誘導(dǎo)五種實(shí)體腫瘤細(xì)胞分化及其對維甲酸受體RARs和RXRs表達(dá)的影響.pdf

1、目的:本研究觀察新型維甲酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基維甲酸酯(4-amino-2-trifluoromethyl-phenyl retinate, ATPR)對食管癌細(xì)胞株ECA-109、胃癌細(xì)胞株MGC80-3、胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1、宮頸癌細(xì)胞株HeLa及神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y增殖的影響和誘導(dǎo)分化的活性,并探討其作用的分子機(jī)制。
　　方法:
　　1.新型維甲酸類衍生物ATPR(10-4、10-5、10-6、1

2、0-7、10-8、10-9mol/L)作用于腫瘤細(xì)胞株ECA-109、MGC80-3、PANC-1、HeLa、SH-SY5Y細(xì)胞后,通過MTT法檢測細(xì)胞的增殖情況;瑞氏吉姆薩染色法在倒置相差顯微鏡下觀察加藥處理前后細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化;分光光度法檢測胃癌細(xì)胞分化標(biāo)志酶ALP、LDH活性,酶聯(lián)免疫法檢測食管癌細(xì)胞分化標(biāo)志酶鱗狀上皮癌相關(guān)抗原(SCC-Ag)活性、胰腺癌標(biāo)志物糖鏈抗原199(CA199)和宮頸癌標(biāo)志物糖鏈抗原125(CA125)活

3、性,免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測神經(jīng)母細(xì)胞瘤分化標(biāo)志物神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)活性;流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞周期的變化。
　　2.選擇MGC80-3、SH-SY5Y細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對象,設(shè)空白對照組(加入等體積的DMEM)、溶劑對照組(含0.05％無水乙醇)、陽性對照組ATRA(10-5 mol/L)及實(shí)驗(yàn)組ATPR(10-5mol/L),采用RT-PCR技術(shù)檢測ATPR用藥72h后引起的細(xì)胞中維甲酸受體RARα,RARβ,RARγ,RXRα,R

4、XRβ,RXRγmRNA表達(dá)的變化。3.為進(jìn)一步觀察ATPR對RARs和RXRs影響的時(shí)效學(xué)變化,采用RT-PCR法檢測ATPR(10-5mol/L)分別用藥0、1、3、5、7d后MGC80-3、SH-SY5Y細(xì)胞中維甲酸受體RARα,RARβ,RARγ,RXRα,RXRβ,RXRγ轉(zhuǎn)錄水平的變化情況。
　　結(jié)果:
　　1.ATPR(10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9mol/L)體外用藥可抑制食管癌細(xì)

5、胞株ECA-109、胃癌細(xì)胞株MGC80-3、胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1、宮頸癌細(xì)胞株HeLa及神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞SH-SY5Y的增殖,且隨著劑量的增加,抑制效應(yīng)增強(qiáng),抑制作用于藥物作用48h后出現(xiàn),72h后達(dá)峰值。ATPR濃度為10-4 mol/L時(shí),藥物對細(xì)胞增殖的抑制效率明顯高于其他劑量組,且鏡下觀察發(fā)現(xiàn)5種細(xì)胞株均出現(xiàn)皺縮、凋亡。瑞氏吉姆薩染色結(jié)果顯示ATPR(10-5、10-6、10-7、10-8、10-9mol/L)體外用藥可誘

6、導(dǎo)上述實(shí)體腫瘤細(xì)胞形態(tài)趨于成熟分化。與對照組比較,ATPR用藥組ECA-109細(xì)胞分泌SCC-Ag活性下降(P<0.05)、MGC80-3細(xì)胞中ALP、LDH減少(P<0.05)、HeLa細(xì)胞CA125濃度下降(P<0.05)、SH-SY5Y細(xì)胞NSE水平上升(P<0.05)。而ATPR用藥組PANC-1細(xì)胞分泌CA199水平有下降趨勢,但與空白對照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05);流式細(xì)胞儀結(jié)果顯示ATPR(10-5、10-6、10

7、-7、10-8、10-9mol/L)用藥后各腫瘤細(xì)胞G0/G1期細(xì)胞表達(dá)量增加,S期減少,細(xì)胞周期進(jìn)程受影響,細(xì)胞阻滯在G0/G1期。
　　2.ATPR(10-5 mol/L)、ATRA(10-5 mol/L)作用72h后,與空白對照組相比,MGC80-3中RARα、RARβ表達(dá)量升高,RARγ,RXRα,RXRβ,RXRγ表達(dá)量無明顯變化;SH-SY5Y中RARα、RARβ表達(dá)量升高,RXRα表達(dá)量下降,而RARγ,RXRβ,

8、RXRγ表達(dá)量無明顯變化。
　　3.ATPR(10-5 mol/L)用藥0、1、3、5、7d后,MGC80-3中RARα、RARβ、RXRγ表達(dá)量升高,RARγ,RXRα,RXRβ表達(dá)量無明顯變化;SH-SY5Y中 RARα、RARβ表達(dá)量升高,RXRα表達(dá)量下降,RARγ,RXRβ,RXRγ表達(dá)量無明顯變化。
　　結(jié)論:
　　1.4-氨基-2-三氟甲基苯基維甲酸酯ATPR(10-4、10-5、10-6、10-7、10

9、-8、10-9mol/L)可抑制食管癌細(xì)胞株ECA-109、胃癌細(xì)胞株MGC80-3、宮頸癌細(xì)胞株HeLa及神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞的增殖并誘導(dǎo)其分化;4-氨基-2-三氟甲基苯基維甲酸酯ATPR(10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9mol/L)可抑制胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1增殖,但誘導(dǎo)分化活性有待于進(jìn)一步研究。
　　2.維甲酸受體RARα、RARβ、RXRγ可能與ATPR對胃癌細(xì)胞株MGC80-3的生長