內(nèi)皮祖細胞對兔急性肺損傷炎癥因子的影響.pdf

1、背景:
　　 長期以來，人們雖然對急性肺損傷(acute lung injury，ALI)/急性呼吸窘迫綜合征(acute respiratory distress syndrome，ARDS)進行大量的基礎和臨床研究，但治療一直沒有取得大的突破，主要還是治療原發(fā)病，根據(jù)其病理生理改變和臨床表現(xiàn)，進行針對性和支持性治療，目前ALI/ARDS的病死率仍高達50％～60％[1]。肺部炎癥反應是ALI/ARDS的主要特征，細胞因子在其

2、發(fā)病機制中起著重要作用。其中TNF-α[2]、IL-1作用較為重要，被稱為前炎癥細胞因子，啟動、級聯(lián)和擴大炎癥效應，加重肺損傷。
　　 內(nèi)皮祖細胞(EPCs)是一種由骨髓產(chǎn)生的特異性前體細胞，在機體創(chuàng)傷、應激、炎癥等刺激下，可以動員、遷移、歸巢至損傷部位，旁分泌、自分泌特定的細胞因子，分化成為成熟的內(nèi)皮細胞，促進新生血管的生成，以利于機體損傷的修復、愈合。目前內(nèi)皮祖細胞在心血管疾病和組織工程領域已有較大應用，而且已有實驗證實炎癥

3、反應時內(nèi)皮祖細胞外周血高表達，同時炎癥損傷部位可見內(nèi)皮祖細胞的增值、分化。
　　 目的:
　　 通過將同源同種外周血培養(yǎng)的內(nèi)皮祖細胞輸注到乳化油酸誘導的急性肺損傷兔模型中，檢測不同組別中兔肺組織TNF-a、IL-1的表達差異，來初步評估內(nèi)皮祖細胞對兔急性肺損傷中炎癥因子的影響。
　　 方法:
　　 實驗部分一:經(jīng)新西蘭大白兔耳中央動脈抽取外周血，通過密度梯度離心法提取單形核細胞層，接種六孔板予EGM-2培

4、養(yǎng)液培養(yǎng);培養(yǎng)過程中在第7天時提取部分細胞用Dil-ac-LOL和FITC-UEA21雙熒光染色鑒定，證實細胞為分化中的內(nèi)皮祖細胞。
　　 實驗部分二:體重為2.5～3 kg的雄性新西蘭大白兔30只，經(jīng)隨機數(shù)字表隨機分配為3組。
　　 1.組一:實驗組:經(jīng)兔耳緣靜脈注射20％乳化油酸(0.3ml/kg)，20分鐘內(nèi)注射完畢并觀察動物的呼吸變化。穩(wěn)定30分鐘后予血氣分析氧合指數(shù)＜300確認急性肺損傷模型建立。注射20％乳化

5、油酸完畢60分鐘，經(jīng)兔耳緣靜脈輸注EPCs105/0.5mlPBS液。兔繼續(xù)飼養(yǎng)48小時然后處死，肺動脈、肺組織被取出。
　　 2.組二:對照組:經(jīng)兔耳緣靜脈注射20％乳化油酸(0.3ml/kg)，20分鐘內(nèi)注射完畢并觀察動物的呼吸變化。穩(wěn)定30分鐘后予血氣分析氧合指數(shù)＜300確認急性肺損傷模型建立。注射20％乳化油酸完畢60分鐘，經(jīng)兔耳緣靜脈輸注0.5ml空白PBS液。兔繼續(xù)飼養(yǎng)48小時然后處死，肺動脈、肺組織被取出。

6、　　 3.組三:空白組:經(jīng)兔耳緣靜脈注射生理鹽水乳化液(0.3ml/kg)，20分鐘內(nèi)注射完畢并觀察動物的呼吸變化。穩(wěn)定30分鐘后予血氣分析正常范圍。注射生理鹽水乳化液完畢60分鐘，經(jīng)兔耳緣靜脈輸注0.5ml空白PBS液。兔繼續(xù)飼養(yǎng)48小時然后處死，肺動脈、肺組織被取出。
　　 實驗部分三:將實驗組、對照組、空白組標本石蠟包埋后提取蛋白樣品，經(jīng)Western blot方法測定TNF-α、IL-1。
　　 結果: