不可切除的胰腺癌患者介入治療后回顧性生存分析及吉西他濱耐藥相關microRNAs的實驗研究.pdf

1、第一部分不可切除的胰腺癌患者介入治療后回顧性生存分析
　　目的:通過對不可切除的胰腺癌患者介入治療后回顧性生存分析，評估影響胰腺癌介入治療后生存期的因素，探索有效的胰腺癌介入治療方案。
　　資料與方法:收集并回顧性分析159例胰腺癌患者的介入治療病史資料，并對影響胰腺癌患者介入治療后生存期的因素和治療模式進行單因素及COX模型多因素分析。
　　結果:159例患者總隨訪中位生存期(MST)為10.32個月，總的介入治療后

2、MST為8.11個月。總1年累積生存率27.0％，2年累積生存率11.0％，3年累積生存率2.0％，5年累積生存率為0.6％。根據(jù)臨床反應率(CBR)評估判定介入治療后能緩解癥狀的介入次數(shù)平均值為2.6次。單因素分析顯示影響胰腺癌介入治療后MST的主要因素有:初次介入治療前CA199值，第一次介入術后CA199的變化，初次介入前KPS評分，初次介入前癥狀，介入治療前肝功能分級，介入治療前有無手術史，介入治療次數(shù)。而年齡，性別，初次介入前

3、血紅蛋白值，腫瘤分期（Ⅱ-Ⅲ期與Ⅳ期），初次介入時CEA的值，初次介入前后CEA的變化，治療藥物（是否含吉西他濱+奧沙利鉑），治療方案（TAI和TACE），術前是否存在糖尿病，腫瘤部位（是否為胰頭部），病理是否為導管腺癌，均顯示差異無明顯統(tǒng)計學意義。多因素分析顯示對介入治療后生存期有影響的獨立因素是:開始介入治療時肝功能分級，初抬時KPS評分，有無原發(fā)灶手術切除史。
　　結論:介入治療包括TAI和TACE對于胰腺癌患者在改善患者癥

4、狀和延長中位生存期方面有一定的治療作用，介入治療后生存期與患者的體力狀態(tài)，存在癥狀和有無早期手術治療有關。早診早治和降低胰腺癌對化療的耐藥性研究成為我們的研究方向。
　　第二部分21G細針穿刺抽吸及空芯切割活檢法診斷效率和安全性回顧性研究
　　目的:應用21G細針穿刺抽吸及空芯切割(FNAC)活檢方法，與用18G空芯穿刺活檢槍相比在肝腫瘤穿刺活檢中的安全性和診斷效率，并探討21G FNAC在胰腺腫瘤穿刺活檢中的安全性和診斷效

5、率。
　　資料與方法:1.94例CT或MRI及腫瘤指標臨床診斷為肝惡性腫瘤，無法行手術切除擬行經(jīng)動脈化療栓塞治療(TACE)，欲明確其病理類型的患者，行肝穿刺活檢以明確病理類型。隨機分為18G TCN組和21G FNAC組.均在B超引導下穿刺進入腫瘤組織內，對照組18G TCN組直接用18G True-cut活檢槍取材;21GFNAC組用21G穿刺針穿刺入腫瘤組織內后，拔出針芯，接注射器，用空心針于腫瘤組織內反復切割抽吸數(shù)次，將切

6、割抽吸所得組織和穿刺液送病理組織檢查和細胞學檢查。穿刺結束后，行腫瘤動脈血管造影，明確有無穿刺道出血表現(xiàn)。并根據(jù)腫瘤病情給予TACE治療。統(tǒng)計比較分析2組穿刺方法的總陽性率及安全性有無差異。2.用21G FNAC法對18例胰腺腫瘤穿刺活檢，分析其并發(fā)癥發(fā)生情況和總陽性率。
　　結果:1.2組肝穿刺患者均完成穿刺活檢，結合穿刺組織病理和細胞學檢查得出總陽性率，其中18G TCN組總陽性率為89.1％(41/46)，造影顯示穿刺道肝包

7、膜下出血率6.5％(3/46)，與穿刺有關的疼痛率78.3％(36/46)，穿刺后小動靜脈瘺形成8.7％(4/46)。21G FNAC組總陽性率81.3％(39/48)，2組總陽性率經(jīng)統(tǒng)計學檢驗差異無統(tǒng)計學意義（P值＞0.05）。穿刺后造影無包膜下出血，無動靜脈瘺形成，與穿刺有關的疼痛率為22.9％(11/48)，2組之間的差異有統(tǒng)計學意義。2組所有與穿刺有關的疼痛患者均為輕微疼痛(VAS＜3)在術后第2-3d好轉，無需使用鎮(zhèn)痛劑。無一

8、例患者出現(xiàn)氣胸、胸腔積液、腹膜炎。隨訪3個月后兩組均無穿刺道種植。2.18例胰腺腫瘤患者用21G FNAC法均穿刺成功，TPR為61.1％(11/18)，穿刺有關疼痛率為27％(5/18)，胰腺炎發(fā)生率0.56％(1/18)，無其它并發(fā)癥發(fā)生。
　　結論:21G FNAC與18G TCN都能在肝穿刺中獲得足夠用于病理診斷的組織樣本，21G FNAC與18G TCN相比在TPR方面差異無明顯統(tǒng)計學意義，但是在安全性方面優(yōu)于18G T

9、CN。21G FNAC的安全性和診斷率可適用于胰腺腫瘤穿刺活檢。
　　第三部分吉西他濱耐藥相關microRNAs的實驗研究
　　目的:通過體外模擬胰腺癌細胞接觸化療藥物，形成耐藥的過程，尋找與胰腺癌耐藥形成過程中的相關microRNAs(miRNAs)，并探索興趣miRNA對胰腺癌耐藥形成相關的基因表達的調節(jié)情況，以及對臨床用藥的指導意義。
　　材料與方法:采用BxPC-3胰腺癌細胞株建立吉西他濱耐藥株，用濃度遞增和短

10、時作用法誘導，取對數(shù)生長期的細胞加吉西他濱作用48小時，從低濃度2ng/ml遞增至30ng/ml，作用后，換液清洗敏感死亡細胞，再加藥篩選，如此反復誘導，得到耐藥株細胞。取BxPC-3胰腺癌細胞與吉西他濱耐藥細胞株進行miRNA芯片檢測，對比找出下調的miRNAs，并分析其主要調控的基因。用Real-time PCR和Western免疫印跡(Western Bolt)檢測這些基因在耐藥形成中的表達情況，驗證芯片結果。
　　結果:成

11、功建立了吉西他濱耐藥的BxPC-3胰腺癌細胞系。通過芯片檢測和分析，找到和親本細胞相比，耐藥株細胞表達顯著上調的miRNAs有11條，顯著下調的miRNAs有23條。對結果進行網(wǎng)絡調控分析表明:has-mir-20a在調控網(wǎng)絡中的度為最高，其調控的靶基因中ABCG2的度為最高。Real-time PCR的結果表明，和親本細胞相比，耐藥株細胞has-mir-20a表達下調，驗證了芯片結果。而Western bolt檢測出ABCG2的表達顯