骨髓增生異常綜合征線粒體DNA D-LOOP區(qū)突變的研究.pdf

1、　　研究目的 線粒體(mitochondrial)是迄今為止發(fā)現(xiàn)的人類細(xì)胞核外唯一具有自己的基因組,并能不依賴核基因組進(jìn)行復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和翻譯的細(xì)胞器。近年來,線粒體DNA(mtDNA)的改變在人類腫瘤發(fā)生中的作用開始受到關(guān)注。線粒體DNA的D-loop區(qū)(16028-577bp,位于tRNApro和tRNAphe之間)是線粒體DNA的主要非編碼區(qū),占全部線粒體DNA的6%左右,遺傳上是高變區(qū)。本實(shí)驗(yàn)的主要目的是,提取并擴(kuò)增骨髓增生異常綜合

2、征(MDS)患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞(BMMNC)中的線粒體DNA D-loop區(qū)片段全長,并進(jìn)行測序,總結(jié)這些患者mtDNA D-loop區(qū)的突變和突變規(guī)律,為研究mtDNA D-loop區(qū)突變與骨髓增生異常綜合征發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系以及探索骨髓增生異常綜合征的診治新途徑提供線索。
　　研究方法 選取的20例MDS患者均來自齊魯醫(yī)院2004年8月~2005年8月的門診及住院病人,其中難治性貧血(RA)4例,環(huán)形鐵粒幼細(xì)胞性貧血(RAS)2

3、例,原始細(xì)胞增多性難治性貧血1型(RAEB-1)5例,原始細(xì)胞增多性難治性貧血2型(RAEB-2)4例,骨髓增殖性疾病(MDS/MPD)5例。所有病例均在無菌條件下抽取骨髓液2ml,以淋巴細(xì)胞分離液用差速離心法分離骨髓單個(gè)核細(xì)胞,用酚。氯仿抽提法提取基因組DNA,設(shè)計(jì)用于擴(kuò)增mtDNA D-loop區(qū)全長的引物,上游引物為：5’-ATCATTGGACAAGTAGCATC-3’(nt15791-nt15810),下游引物為5’-GGTGA