N-,0-期甲狀腺乳頭狀癌頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的分子標(biāo)志物研究.pdf

1、目的：cN0期甲狀腺乳頭狀癌只是臨床概念，仍有相當(dāng)數(shù)量的患者術(shù)后病理證實(shí)存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。甲狀腺乳頭狀癌頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高而且有明顯的區(qū)域轉(zhuǎn)移傾向，文獻(xiàn)報(bào)道首次治療時(shí)即有60.9％的病人發(fā)生頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移[1]。已有的研究證實(shí)CyclinD1、c-Met過(guò)度表達(dá)在PTC發(fā)生發(fā)展過(guò)程中可能起著重要作用。本研究旨在驗(yàn)證N0期甲狀腺乳頭狀癌(PTC)頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)的分子標(biāo)志物。應(yīng)用RT-PCR和FQ-PCR法檢測(cè)甲狀腺腫瘤組織中的c-Met和C

2、yclinD1mRNA表達(dá)量的高低與腫瘤的良惡性、年齡、性別和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是否相關(guān)，探討甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)生機(jī)制，研究其基因的異常表達(dá)與臨床病理學(xué)特征之間的關(guān)系，并為其早期分子診斷、臨床手術(shù)和靶基因治療提供客觀依據(jù)。 方法：研究對(duì)象為66例甲狀腺疾病患者，均無(wú)放化療史，均行手術(shù)切除。設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)的陽(yáng)性對(duì)照組為36例甲狀腺癌病人，其中經(jīng)病理證實(shí)為淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者21例，無(wú)淋巴結(jié)鞘移者15例。陰性對(duì)照組為30例甲狀腺良性病變及癌旁正常甲狀腺

3、組織。采集新鮮手術(shù)切除組織標(biāo)本，液氮下研磨后，提取總RNA，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄，均以β-action為內(nèi)參進(jìn)行PCR及FQ-PCR擴(kuò)增，經(jīng)2％瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)β-action和目的基因CyclinD1、c-MetmRNA在陰性對(duì)照組和陽(yáng)性對(duì)照組中的表達(dá)。比較CyclinD1和c-Met在良性對(duì)照組、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組之間的表達(dá)狀態(tài)，分析甲狀腺良惡性病變、甲狀腺乳頭狀癌間表達(dá)差異，比較甲狀腺癌病人的年齡、性別、淋巴結(jié)有無(wú)轉(zhuǎn)移與Cycl

4、inD1和c-Met表達(dá)的關(guān)系，并檢測(cè)CyclinD1和c-Met在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)有無(wú)相關(guān)關(guān)系。統(tǒng)計(jì)方法采用方差分析、t檢驗(yàn)和相關(guān)分析。 結(jié)果：RT-PCR和FQ-PCR法相對(duì)定量檢測(cè)隨機(jī)選取的36例N0期甲狀腺乳頭狀癌患者和30例甲狀腺良性病變，甲狀腺乳頭狀癌組中，術(shù)后切除標(biāo)本病理檢查有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者20例，其頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移發(fā)生率為55.56％。術(shù)后切除的外科標(biāo)本中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組c-Met和CyclinD1的表達(dá)明顯高于

5、術(shù)后外科切除標(biāo)本中未發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組(P<0.05)，c-Met表達(dá)量在男性組高于女性組，小于45歲組高于大于等于45歲組，而CyclinD1的表達(dá)量在上述分組中無(wú)明顯表達(dá)差異。良惡性對(duì)照組之間，c-Met的表達(dá)量惡性組明顯高于良性對(duì)照組，而CyclinD1在兩組間無(wú)明顯差異。在惡性對(duì)照組中，c-Met和CyclinD1的表達(dá)無(wú)明顯相關(guān)關(guān)系。 結(jié)論：應(yīng)用RT-PCR和FQ-PCR法檢測(cè)甲狀腺腫瘤組織中的c-MetmRNA表達(dá)量的

6、高低與腫瘤的良惡性、年齡、性別和淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移具有顯著的意義。CyclinD1在良惡性對(duì)照組中表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但是在甲狀腺乳頭狀癌淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移組表達(dá)量明顯高于無(wú)轉(zhuǎn)移組。以上提示c-Met、CyclinD1在轉(zhuǎn)錄水平的異常表達(dá)可能是甲狀腺乳頭狀癌發(fā)生頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的早期分子事件。與常規(guī)病理檢測(cè)甲狀腺乳頭狀癌的包膜侵犯情況決定手術(shù)方式相比，能更早地預(yù)測(cè)腫瘤細(xì)胞的淋巴轉(zhuǎn)移，而且具有更高的準(zhǔn)確性。本研究結(jié)果初步表明CyclinD1和c-Met