擬南芥受十字花科黑腐病菌誘導(dǎo)或抑制的miRNA的鑒定.pdf

1、miRNA(microRNA)是存在于真核生物細(xì)胞中長(zhǎng)度～22nt(nucleotide)的內(nèi)源非編碼RNA。miRNA參與生長(zhǎng)發(fā)育、組織分化、腫瘤發(fā)生、細(xì)胞凋亡等一系列重要的生命過(guò)程。此外，miRNA在植物對(duì)抗病原菌入侵的防衛(wèi)反應(yīng)中起重要作用。擬南芥是研究寄主植物與病原菌互作分子機(jī)理的模式植物。目前人們已經(jīng)在擬南芥中發(fā)現(xiàn)了多個(gè)參與對(duì)抗丁香假單胞菌(Pseudomonas syringae pv.Syringae，Pst)入侵的miRN

2、A。十字花科黑腐病菌(Xanthomonas campestris pv.Campestris，Xcc)是引起十字花科植物黑腐病的病原菌，同時(shí)也可以侵染擬南芥。但是，參與對(duì)抗Xcc侵染的擬南芥miRNA至今未見(jiàn)報(bào)道。研究表明，在對(duì)抗病原菌入侵的防衛(wèi)反應(yīng)中起重要作用的miRNA的表達(dá)往往會(huì)受到病原菌的誘導(dǎo)或者抑制。本研究的目的是鑒定擬南芥中受Xcc誘導(dǎo)或者抑制的miRNA，為鑒定在對(duì)抗Xcc侵染過(guò)程中起重要作用的miRNA打下基礎(chǔ)。

3、>　　為此，我們首先采用高通量RNA測(cè)序(RNA-seq)技術(shù)，測(cè)定了擬南芥在沒(méi)有感染以及在感染Xcc后的不同時(shí)期的miRNA表達(dá)譜，并通過(guò)差異表達(dá)分析確定受Xcc誘導(dǎo)或抑制的候選的miRNA;然后采用定量Northern雜交方法對(duì)這些候選miRNA進(jìn)行驗(yàn)證。在進(jìn)行高通量RNA測(cè)序前，我們首先建立了一種適合于測(cè)定擬南芥與病原菌互作過(guò)程中寄主和病原菌轉(zhuǎn)錄組變化的接種方法—真空抽濾法。隨后，我們測(cè)定了哥倫比亞0生態(tài)型(Col-0)擬南芥在沒(méi)

4、有感染以及在感染Xcc和hrcV基因突變體(△hrcV)后2、6、12和24小時(shí)的miRNA表達(dá)譜;通過(guò)表達(dá)差異分析，確定了10個(gè)受Xcc誘導(dǎo)的候選miRNA。定量Northern雜交驗(yàn)證結(jié)果顯示，miR166和miR393在接種Xcc后2小時(shí)時(shí)的達(dá)量顯著升高，而miR160和miR156在接種后24小時(shí)時(shí)的表達(dá)量顯著升高，說(shuō)明這些miRNA的表達(dá)受Xcc誘導(dǎo)。此外，通過(guò)Northern雜交，我們還發(fā)現(xiàn)了3個(gè)新的擬南芥miRNA。