十字花科黑腐病菌XC1038基因的功能鑒定.pdf

1、十字花科黑腐病菌（Xanthomonas campestris pv．campestris，簡稱Xcc）是一種能引起所有十字花科植物黑腐病的重要病原細(xì)菌，也是研究微生物與寄主相互作用機(jī)理的重要模式菌。為了系統(tǒng)地研究Xcc基因的功能，本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建了Tn5gusA5插入突變體庫，并篩選出了一批致病力降低的突變體。本研究選取了其中10個(gè)假設(shè)蛋白基因作為研究對象，通過定點(diǎn)突變和互補(bǔ)對這些基因的功能進(jìn)行分析。首先運(yùn)用自消除質(zhì)粒pK18mob系統(tǒng)對

2、XC0612、XC0621、XC0622、XC0865、XC1038、XC1426、XC2021、XC2423、XC2565和XC3414進(jìn)行突變，獲得了這些基因相應(yīng)的突變體。
　　 致病性檢測結(jié)果表明，只有NK1038和PK1038致病力下降明顯，分別為野生型的1.1％和2％，其余11個(gè)突變體與野生型相比沒有明顯差異。表型檢測發(fā)現(xiàn)，與野生型相比，突變體PK1038的EPS產(chǎn)量、胞外酶的活性、生物膜的形成、泳動性及過敏反應(yīng)等均無

3、明顯差異；其在寄主體內(nèi)的繁殖能力減弱，在NYGB中生長速度降低，在MMX中停止生長。通過氨基酸補(bǔ)缺實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)NK1038和PK1038均為L-甲硫氨酸營養(yǎng)缺陷型。采用PCR的方法擴(kuò)增包含完整的XC1038的DNA片段并克隆到pLAFR3上，將獲得的重組質(zhì)粒分別導(dǎo)入突變體NK1038和PK1038進(jìn)行功能互補(bǔ)，發(fā)現(xiàn)其表型變化都能基本得到恢復(fù)。
　　 本研究結(jié)果表明XC1038是一個(gè)與L-甲硫氨酸合成相關(guān)的基因。推測可能是因?yàn)橥蛔凅w