NDRG2對腸缺血再灌注肺損傷中肺保護機制的研究.pdf

1、研究背景:
　　盡管現(xiàn)代醫(yī)學科學發(fā)展迅猛,醫(yī)療方法不斷建立和發(fā)展完善,但是急性肺損傷(Acute lung injury,ALI)仍是一種危重的臨床綜合征,致死率高。腸缺血再灌注(intestinal ischemia/reperfusion,II/R)是導(dǎo)致腸移植、心肺轉(zhuǎn)流、創(chuàng)傷與出血等多種臨床并發(fā)癥造成器官損傷的主要原因[1-4]。研究表明,腸缺血再灌注損傷致使腸粘膜結(jié)構(gòu)和絨毛皺縮以及上皮功能逐漸減退,最終導(dǎo)致腸屏障功能完整性

2、破壞和細菌遷移[1,5,6]。進一步研究發(fā)現(xiàn)II/R同樣是導(dǎo)致多器官功能障礙綜合征(Multiple Organ Dysfunction Syndrome,MODS)尤其是急性呼吸窘迫綜合癥(Acute Respiratory Distress Syndrome,ARDS)的重要發(fā)病機理[2,3]。然而,II/R導(dǎo)致肺損傷更全面清晰的機制尚未完全研究清楚。
　　核轉(zhuǎn)錄因子-kappa B(Nuclear factor-kappa

3、B,NF-κB)蛋白能夠介導(dǎo)多種基因在免疫、急性炎癥反應(yīng)、細胞粘附、分化、氧化應(yīng)激和凋亡的表達[7,8]。其在II/R引起的局部和全身炎癥反應(yīng)發(fā)揮重要的作用[9,10]。因此,研究NF-κB信號傳導(dǎo)通路的調(diào)控機制是治療II/R肺損傷的新策略[11,12]。
　　N-myc下游調(diào)節(jié)基因2(N-myc downstream regulated gene2,NDRG2)是NDRG家族基因(包括NDRG1-4)之一,廣泛分布于多種組織和器

4、官中,正常表達于肺泡間質(zhì)與肺泡上皮細胞[13]。NDRG2的過表達可顯著降低Iκκα/β復(fù)合體磷酸化,從而阻斷IκBα磷酸化和p65核移位,抑制NF–κB信號傳導(dǎo)通路活化,最終抑制腫瘤細胞的生長[14]。相關(guān)研究也證實,NDRG2和NF-κB在心肌細胞、萊氏細胞中也均有重要的作用[15,16]。
　　實驗?zāi)康?
　　通過建立大鼠腸缺血再灌注肺損傷(Intestinal ischemia/reperfusion induced

5、 lung injury,II/RI)模型,檢測NDRG2在肺組織中的表達,初步分析NDRG2與NF-κB信號傳導(dǎo)通路在腸缺血再灌注肺損傷中的相關(guān)性。進一步為再灌注損傷的臨床診斷、治療等各方面提供新的理論依據(jù)。
　　實驗方法:
　　1.采用免疫組織化學、Western-blot蛋白免疫印跡方法,檢測NDRG2及NF-κB在腸缺血再灌注肺損傷中的蛋白定位及表達情況。
　　2.采用RT-PCR法,檢測NDRG2及NF-κB

6、在腸缺血再灌注肺損傷中的mRNA表達量。
　　3.分析NF-κB與NDRG2兩者的表達量是否具有相關(guān)性。
　　4.TUNEL法檢測再灌注損傷致細胞凋亡情況,探討缺血再灌注肺損傷是否促進NF-κB傳導(dǎo)通路活化,誘導(dǎo)細胞凋亡。
　　實驗結(jié)果:
　　1.免疫組化、Western-blot蛋白免疫印跡結(jié)果顯示:NDRG2在腸缺血再灌注肺損傷中表達減低,與對照組差異性顯著(P<0.05);NF-κB在腸缺血再灌注肺損傷中表

7、達明顯升高(P<0.05),與對照組差異性顯著,有統(tǒng)計學意義。
　　2.RT-PCR法顯示:NDRG2mRNA表達水平在實驗組中明顯降低(P<0.05);NF-κBmRNA表達量增加,與對照組差異性顯著(P<0.05),有統(tǒng)計學意義。
　　3.NDRG2和NF-κB兩種蛋白表達的相關(guān)性檢驗,二者呈顯著負相關(guān)(r=-0.814,P<0.05),有統(tǒng)計學意義。
　　4.TUNEL染色,I/R組凋亡指數(shù)依次分別為(16.21

8、±1.34)％、(37.91±2.15)%、(24.15±2.43)%、(17.15±2.53)%與Control組(1.21±0.71)%相比凋亡細胞明顯升高,結(jié)果有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　實驗結(jié)論:
　　腸缺血再灌注肺損傷中明顯存在肺組織NDRG2表達量降低,而且,NDRG2表達降低的同時肺組織NF-κB表達量明顯增強,提示NDRG2在NF-κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在腸缺血再灌注肺損傷中可能發(fā)揮重要作用。NDRG2可能